本書(shū)以研究生在進(jìn)行植物發(fā)育生物學(xué)研究過(guò)程中需要使用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)為主題,系統(tǒng)地介紹相關(guān)的植物分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)的基本研究技術(shù)與方法。全書(shū)共分為四大章:第一章介紹植物形態(tài)觀察常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù):石蠟切片制作,半薄切片和電鏡切片的制作等;第二章著重闡述分子生物學(xué)相關(guān)的檢測(cè)實(shí)驗(yàn):包括定量檢測(cè)基因表達(dá)量的qRT-PCR,檢測(cè)基因表達(dá)模式的切片原位雜交和整體原位雜交,蛋白的免疫定位和激素的免疫定位等技術(shù);第三章為植物發(fā)育生物學(xué)常用的多種互作檢測(cè)技術(shù):涉及到蛋白-蛋白,基因與蛋白互作相關(guān)的凝膠阻滯電泳、雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)及酵母雙雜交等技術(shù);第四章闡述了轉(zhuǎn)基因和突變體中常用的檢測(cè)方法。
《植物發(fā)育生物學(xué)常用實(shí)驗(yàn)技術(shù)》匯聚了作者多年來(lái)在植物發(fā)育生物學(xué)研究中常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)的經(jīng)驗(yàn),體現(xiàn)了作者們科研過(guò)程中積累的精華。
王東輝,北京大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院教師,博士,高級(jí)工程師,主要從事植物發(fā)育生物學(xué)技術(shù)的研究,長(zhǎng)期承擔(dān)植物發(fā)育生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課程,發(fā)表相關(guān)論文多篇。
目 錄
第一章 形態(tài)觀察常用技術(shù)方法 (1)
1-1 植物組織石蠟切片的制作 (1)
1-2 植物材料半薄切片 (5)
1-3 透射電子顯微鏡樣品的制備 (9)
1-4 掃描電子顯微鏡樣品制備及觀察 (15)
第二章 分子水平的檢測(cè)技術(shù) (25)
2-1 植物總RNA的提取及逆轉(zhuǎn)錄 (25)
2-2 全轉(zhuǎn)錄組擴(kuò)增及目的基因表達(dá)水平定量檢測(cè) (28)
2-3 Southern雜交 (31)
2-4 Northern雜交 (37)
2-5 原位雜交 (42)
2-6 整體原位雜交 (48)
2-7 蛋白質(zhì)印跡法(免疫印跡試驗(yàn)) (53)
2-8 蛋白免疫定位 (57)
2-9 ABA及IAA免疫定位實(shí)驗(yàn) (61)
第三章 蛋白-蛋白,蛋白-基因之間的互作檢測(cè)技術(shù) (66)
3-1 染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP) (66)
3-2 GST-pull down技術(shù)分析植物蛋白相互作用 (71)
3-3 酵母單雜交 (76)
3-4 酵母雙雜交 (79)
3-5 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)EMSA (83)
3-6 雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù) (90)
3-7 Co-IP檢測(cè)體內(nèi)蛋白相互作用 (95)
第四章 轉(zhuǎn)基因植株及突變體植株的指標(biāo)檢測(cè) (99)
4-1 T-DNA插入突變體基因型的鑒定方法 (99)
4-2 PEG介導(dǎo)的擬南芥和水稻葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化 (102)
4-3 植物發(fā)育研究中常用的染色方法 (106)
4-4 擬南芥轉(zhuǎn)基因技術(shù) (109)
4-5 基因槍介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法 (112)
4-6 石蠟切片植物組織中DNA片段化的TUNEL檢測(cè) (116)
4-7 體外磷酸化實(shí)驗(yàn) (120)