目錄
實(shí)驗(yàn)一毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)知識(shí)與綜合技能1
一、案例與問(wèn)題1
二、毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)概述1
三、毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)規(guī)范與職業(yè)道德3
四、毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要求4
五、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理與實(shí)驗(yàn)者自身防護(hù)6
六、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)流程與基本操作技術(shù)7
七、思考題13
實(shí)驗(yàn)二毒物代謝動(dòng)力學(xué)研究與實(shí)驗(yàn)技術(shù)14
一、教學(xué)目的與意義14
二、背景資料14
三、案例與問(wèn)題14
四、課題設(shè)計(jì)與實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)15
課題名稱(chēng)：對(duì)硫磷與甲基對(duì)硫磷代謝動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)15
五、毒物代謝動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)主要方法與技術(shù)21
【題目】甲基對(duì)硫磷的代謝轉(zhuǎn)化試驗(yàn)21
六、思考題24
實(shí)驗(yàn)三一般毒性研究與實(shí)驗(yàn)技術(shù)25
一、教學(xué)目的與意義25
二、背景資料25
三、案例與問(wèn)題26
四、課題設(shè)計(jì)與實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)26
課題名稱(chēng)：氯胺嘧草醚的一般毒性試驗(yàn)與評(píng)價(jià)26
五、一般毒性試驗(yàn)主要方法與技術(shù)28
（一）急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)28
（二）急性吸入毒性試驗(yàn)33
（三）急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)34
（四）亞慢性毒性實(shí)驗(yàn)35
（五）慢性毒性試驗(yàn)38
六、思考題40
實(shí)驗(yàn)四遺傳毒性研究與實(shí)驗(yàn)技術(shù)41
一、教學(xué)目的與意義41
二、背景資料41
三、案例與問(wèn)題42
四、課題設(shè)計(jì)與實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)42
課題名稱(chēng)：苯并（a）芘的遺傳毒性測(cè)試與評(píng)價(jià)42
五、遺傳毒性試驗(yàn)主要方法與技術(shù)43
（一）鼠傷寒沙門(mén)菌營(yíng)養(yǎng)缺陷型回復(fù)突變?cè)囼?yàn)43
（二）哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn)47
實(shí)驗(yàn)1小鼠淋巴瘤細(xì)胞L5178YTK+基因突變?cè)囼?yàn)48
實(shí)驗(yàn)2中國(guó)倉(cāng)鼠肺V79（CHO）/hGPRT基因突變?cè)囼?yàn)49
（三）小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)51
（四）染色體畸變分析52
實(shí)驗(yàn)1體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)53
實(shí)驗(yàn)2動(dòng)物骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)55
（五）單細(xì)胞凝膠電泳試驗(yàn)56
六、思考題58
實(shí)驗(yàn)五表觀遺傳毒性研究與實(shí)驗(yàn)技術(shù)59
一、教學(xué)目的與意義59
二、背景資料59
三、案例與問(wèn)題59
四、課題設(shè)計(jì)與實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)60
課題名稱(chēng)：某環(huán)境有害因素與表觀遺傳修飾改變的關(guān)聯(lián)性研究60
五、表觀遺傳毒性實(shí)驗(yàn)主要方法與技術(shù)62
（一）DNA甲基化檢測(cè)的主要方法和技術(shù)62
實(shí)驗(yàn)1亞硫酸氫鹽修飾結(jié)合甲基化特異性PCR62
實(shí)驗(yàn)2亞硫酸氫鹽修飾后測(cè)序64
（二）組蛋白修飾檢測(cè)的主要方法和技術(shù)65
實(shí)驗(yàn)1組蛋白特定位點(diǎn)修飾水平的檢測(cè)——蛋白質(zhì)印跡法65
實(shí)驗(yàn)2組蛋白特定位點(diǎn)在基因富集水平的檢測(cè)——染色質(zhì)免疫共沉淀法67
（三）microRNA檢測(cè)的主要方法和技術(shù)69
實(shí)驗(yàn)1實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)microRNA表達(dá)69
實(shí)驗(yàn)2雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)驗(yàn)證microRNA靶基因71
六、思考題72
實(shí)驗(yàn)六致癌作用研究與實(shí)驗(yàn)技術(shù)73
一、教學(xué)目的與意義73
二、背景資料73
三、案例與問(wèn)題74
四、課題設(shè)計(jì)與實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)74
課題名稱(chēng)：NNK致癌作用測(cè)試及評(píng)價(jià)74
五、致癌作用實(shí)驗(yàn)主要方法與技術(shù)76
（一）細(xì)胞體外惡性轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)76
（二）哺乳動(dòng)物長(zhǎng)期致癌實(shí)驗(yàn)81
（三）其他致癌實(shí)驗(yàn)84
六、思考題85
實(shí)驗(yàn)七生殖發(fā)育毒性研究與實(shí)驗(yàn)技術(shù)86
一、教學(xué)目的與意義86
二、背景資料86
三、案例與問(wèn)題86
四、課題設(shè)計(jì)與實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)87
課題名稱(chēng)：鎘及其化合物的生殖發(fā)育毒性評(píng)價(jià)87
五、生殖發(fā)育毒性試驗(yàn)主要方法與技術(shù)89
（一）生育力和早期胚體發(fā)育毒性試驗(yàn)89
（二）致畸試驗(yàn)90
（三）圍生期發(fā)育毒性試驗(yàn)93
（四）一代（或二代）生殖毒性試驗(yàn)94
（五）精子質(zhì)量分析96
（六）性激素水平的測(cè)定97
（七）外源化學(xué)物對(duì)大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞的損傷模型98
（八）外源化學(xué)物對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞的損傷模型100
六、思考題101
實(shí)驗(yàn)八納米材料損害作用研究與實(shí)驗(yàn)技術(shù)102
一、教學(xué)目的與意義102
二、背景資料102
三、案例與問(wèn)題103
四、課題設(shè)計(jì)與實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)103
課題名稱(chēng)：納米二氧化鈦的毒性作用評(píng)價(jià)103
五、納米材料損害作用試驗(yàn)主要方法與技術(shù)105
（一）納米材料的前處理方法105
（二）納米材料表面特征觀察107
（三）納米材料對(duì)細(xì)胞活力的影響108
（四）納米材料急性經(jīng)口毒性實(shí)驗(yàn)109
六、思考題111
實(shí)驗(yàn)九電離輻射損害作用研究與實(shí)驗(yàn)技術(shù)112
一、教學(xué)目的與意義112
二、背景資料112
三、案例與問(wèn)題112
四、課題設(shè)計(jì)與實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)112
課題名稱(chēng)：電離輻射生物損傷效應(yīng)特征及常用檢測(cè)方法112
五、電離輻射損害作用試驗(yàn)主要方法與技術(shù)113
（一）核素溶液配制113
（二）鈾礦塵對(duì)細(xì)胞增殖的影響115
（三）鈾礦塵致支氣管上皮細(xì)胞損傷的活性氧檢測(cè)116
（四）電離輻射致DNA雙鏈損傷的γ-H2AX含量變化檢測(cè)117
六、思考題119
實(shí)驗(yàn)十呼吸系統(tǒng)毒性研究與實(shí)驗(yàn)技術(shù)120
一、教學(xué)目的與意義120
二、背景資料120
三、案例與問(wèn)題121
四、課題設(shè)計(jì)與實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)121
課題名稱(chēng)：PM2. 5急性肺毒性作用研究121
五、呼吸系統(tǒng)毒性試驗(yàn)主要方法與技術(shù)123
（一）潮氣量和氣流流速測(cè)定123
（二）胸內(nèi)壓測(cè)定124
（三）呼吸道液分泌功能測(cè)定——小鼠酚紅排泄法124
（四）支氣管肺泡灌洗液（BALF）分析125
（五）大鼠氣道黏液中肺表面活性物質(zhì)的測(cè)定128
（六）離體試驗(yàn)法128
實(shí)驗(yàn)1離體肺灌流與分析128
實(shí)驗(yàn)2離體氣管片試驗(yàn)法129
實(shí)驗(yàn)3乳鼠肺細(xì)胞原代培養(yǎng)與上皮細(xì)胞純化130
實(shí)驗(yàn)4體外培養(yǎng)的肺巨噬細(xì)胞中乳酸脫氫酶（LDH）
活性測(cè)定131
六、思考題133
實(shí)驗(yàn)十一肝臟毒性研究與實(shí)驗(yàn)技術(shù)134
一、教學(xué)目的與意義134
二、背景資料134
三、案例與問(wèn)題134
四、課題設(shè)計(jì)與實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)135
課題名稱(chēng)：評(píng)價(jià)未知化學(xué)物肝損害及探討其毒性作用機(jī)制135
五、肝臟毒性試驗(yàn)主要方法與技術(shù)136
（一）肝損傷動(dòng)物模型建立136
實(shí)驗(yàn)1急性化學(xué)性肝損傷動(dòng)物模型136
實(shí)驗(yàn)2肝纖維化動(dòng)物模型137
（二）肝臟亞細(xì)胞組分的制備138
實(shí)驗(yàn)1肝臟微粒體的制備138
實(shí)驗(yàn)2肝臟線(xiàn)粒體的制備139
（三）肝損害體內(nèi)評(píng)價(jià)技術(shù)139
實(shí)驗(yàn)1肝微粒體細(xì)胞色素P450含量的測(cè)定139
實(shí)驗(yàn)2丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）活性測(cè)定140
實(shí)驗(yàn)3天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）活性測(cè)定141
實(shí)驗(yàn)4堿性磷酸酶（ALP）活性測(cè)定142
實(shí)驗(yàn)5肝臟排泄功能測(cè)定143
實(shí)驗(yàn)6肝臟分泌功能測(cè)定144
實(shí)驗(yàn)7肝纖維化測(cè)定145
（四）肝損害體外評(píng)價(jià)方法146
實(shí)驗(yàn)1離體肝臟灌流與分析146
實(shí)驗(yàn)2肝細(xì)胞、Kupffer 和Ito細(xì)胞的分離與培養(yǎng)148
實(shí)驗(yàn)3肝細(xì)胞膜流動(dòng)性檢測(cè)150
實(shí)驗(yàn)4肝細(xì)胞線(xiàn)粒體膜通透性檢測(cè)151
實(shí)驗(yàn)5肝細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位檢測(cè)152
實(shí)驗(yàn)6肝細(xì)胞線(xiàn)粒體呼吸功能檢測(cè)153
實(shí)驗(yàn)7肝細(xì)胞線(xiàn)粒體能量代謝功能檢測(cè)155
六、思考題156
實(shí)驗(yàn)十二腎臟毒性研究與實(shí)驗(yàn)技術(shù)157
一、教學(xué)目的與意義157
二、背景資料157
三、案例與問(wèn)題158
（一）案例一158
（二）案例二158
四、課題設(shè)計(jì)與實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)158
課題名稱(chēng)一：中藥關(guān)木通引起大鼠腎臟毒性作用探討158
課題名稱(chēng)二：綜合評(píng)價(jià)百草枯急性中毒引起的腎臟毒性作用159
五、腎臟毒性試驗(yàn)主要方法與技術(shù)160
（一）尿液的一般生化指標(biāo)測(cè)定160
（二）腎臟血流動(dòng)力學(xué)和血流量分析161
（三）腎小球?yàn)V過(guò)率測(cè)定161
（四）血肌酐﹑尿素和尿酸濃度測(cè)定162
（五）腎濃縮稀釋試驗(yàn)163
（六）形態(tài)學(xué)和酶組織化學(xué)檢查163
（七）腎臟微灌注及微穿刺技術(shù)164
（八）腎皮質(zhì)薄片培養(yǎng)及腎膜囊泡的分離與應(yīng)用165
六、思考題166
實(shí)驗(yàn)十三神經(jīng)系統(tǒng)毒性研究與實(shí)驗(yàn)技術(shù)167
一、教學(xué)目的與意義167
二、背景資料167
三、案例與問(wèn)題168
（一）案例一168
（二）案例二168
（三）案例三168
四、課題設(shè)計(jì)與實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)168
課題名稱(chēng)一：評(píng)價(jià)MPTP對(duì)小鼠大腦多巴胺能神經(jīng)元的損傷168
課題名稱(chēng)二：綜合評(píng)價(jià)有機(jī)磷化合物的遲發(fā)性神經(jīng)毒性169
課題名稱(chēng)三：正己烷神經(jīng)毒性及機(jī)制探討170
五、神經(jīng)系統(tǒng)毒性試驗(yàn)主要方法與技術(shù)171
（一）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物神經(jīng)行為學(xué)171
實(shí)驗(yàn)1自主活動(dòng)度檢測(cè)（曠場(chǎng)試驗(yàn)）171
實(shí)驗(yàn)2 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)172
實(shí)驗(yàn)3轉(zhuǎn)棒試驗(yàn)（滾軸試驗(yàn)）173
實(shí)驗(yàn)4后肢撐力實(shí)驗(yàn)173
實(shí)驗(yàn)5抓力測(cè)定174
實(shí)驗(yàn)6感覺(jué)神經(jīng)功能174
方法1. 鼠尾痛覺(jué)測(cè)定174
方法2. 智能熱板儀法175
（二）神經(jīng)病理形態(tài)學(xué)方法175
實(shí)驗(yàn)1神經(jīng)細(xì)胞尼氏體染色175
實(shí)驗(yàn)2免疫組化檢測(cè)MPTP誘導(dǎo)的小鼠大腦多巴胺能神經(jīng)元損傷（SP法）176
（三）周?chē)�神�?jīng)傳導(dǎo)速度測(cè)定178
（四）HPLC熒光法測(cè)定動(dòng)物大腦興奮性神經(jīng)遞質(zhì)178
（五）大鼠海馬組織突觸膜谷氨酸受體的放射配體結(jié)合分析179
（六）神經(jīng)元體外試驗(yàn)體系181
（七）有機(jī)磷農(nóng)藥的遲發(fā)性神經(jīng)毒性評(píng)價(jià)181
六、思考題182
實(shí)驗(yàn)十四免疫毒性研究與實(shí)驗(yàn)技術(shù)183
一、教學(xué)目的與意義183
二、背景資料183
三、案例與問(wèn)題184
四、課題設(shè)計(jì)與實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)184
課題名稱(chēng)：阿特拉津的免疫毒性檢測(cè)與評(píng)價(jià)184
五、免疫毒性試驗(yàn)主要方法與技術(shù)185
（一）體液免疫檢測(cè)185
實(shí)驗(yàn)1溶血空斑實(shí)驗(yàn)185
實(shí)驗(yàn)2血清中免疫球蛋白IgG和IgM的測(cè)定187
（二）特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)187
實(shí)驗(yàn)1淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)187
實(shí)驗(yàn)2遲發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)（delayed-type hypersensi-tivity，DTH）188
實(shí)驗(yàn)3細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL）活性的測(cè)定189
（三）非特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)189
實(shí)驗(yàn)1NK細(xì)胞活性檢測(cè)（乳酸脫氫酶釋放法）189
實(shí)驗(yàn)2巨噬細(xì)胞吞噬能力檢測(cè)190
六、思考題191
實(shí)驗(yàn)十五血液毒性研究與實(shí)驗(yàn)技術(shù)192
一、教學(xué)目的與意義192
二、背景資料192
三、案例與問(wèn)題193
四、課題設(shè)計(jì)與實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)194
五、血液毒性試驗(yàn)主要方法與技術(shù)195
（一）紅細(xì)胞毒性檢測(cè)195
實(shí)驗(yàn)1網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)195
實(shí)驗(yàn)2紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)196
實(shí)驗(yàn)3高鐵血紅蛋白測(cè)定196
實(shí)驗(yàn)4變性珠蛋白小體測(cè)定197
實(shí)驗(yàn)5碳氧血紅蛋白測(cè)定198
實(shí)驗(yàn)6鐵動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)199
（二）白細(xì)胞和血小板毒性檢測(cè)199
實(shí)驗(yàn)1白細(xì)胞墨汁吞噬試驗(yàn)199
實(shí)驗(yàn)2血小板黏附試驗(yàn)200
（三）凝血功能毒性檢測(cè)201
實(shí)驗(yàn)1血漿凝血酶原時(shí)間測(cè)定201
實(shí)驗(yàn)2活化部分凝血活酶時(shí)間測(cè)定202
（四）骨髓毒性檢測(cè)203
實(shí)驗(yàn)1骨髓細(xì)胞學(xué)檢查203
實(shí)驗(yàn)2外源性脾結(jié)節(jié)測(cè)定205
實(shí)驗(yàn)3體內(nèi)擴(kuò)散盒瓊脂培養(yǎng)技術(shù)206
實(shí)驗(yàn)4骨髓微循環(huán)觀察206
六、思考題207
實(shí)驗(yàn)十六皮膚毒性研究與實(shí)驗(yàn)技術(shù)208
一、教學(xué)目的與意義208
二、背景資料208
三、案例與問(wèn)題209
四、課題設(shè)計(jì)與實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)210
課題名稱(chēng)：海娜粉皮膚毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)210
五、皮膚毒性試驗(yàn)主要方法與技術(shù)212
（一）皮膚刺激性/腐蝕性試驗(yàn)212
（二）急性眼刺激性/腐蝕性試驗(yàn)214
（三）皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)217
（四）小鼠耳腫脹試驗(yàn)（mouse ear swelling test，MEST）219
（五）皮膚光毒性試驗(yàn)220
（六）皮膚光變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)221
（七）人體斑貼試驗(yàn)222
（八）人體皮膚試用試驗(yàn)224
六、思考題225
實(shí)驗(yàn)十七毒理學(xué)替代法的應(yīng)用與實(shí)驗(yàn)技術(shù)226
一、教學(xué)目的與意義226
二、背景資料226
三、案例與問(wèn)題227
（一）案例227
（二）問(wèn)題228
四、課題設(shè)計(jì)與試驗(yàn)指導(dǎo)228
課題名稱(chēng)：用毒理學(xué)替代試驗(yàn)對(duì)化妝品原料——果酸的一般毒性和特殊毒性進(jìn)行篩選和檢測(cè)228
五、毒理學(xué)替代試驗(yàn)主要方法與技術(shù)228
（一）急性經(jīng)口毒性替代試驗(yàn)——急性毒性分級(jí)法228
（二）皮膚腐蝕性替代試驗(yàn)——人重組皮膚模型試驗(yàn)232
（三）發(fā)育毒性替代試驗(yàn)——微團(tuán)培養(yǎng)試驗(yàn)（the micromass test，MM Test）234
六、思考題239
實(shí)驗(yàn)十八毒理學(xué)與公共衛(wèi)生安全和管理實(shí)例分析240
一、教學(xué)目的與意義240
二、背景資料240
三、案例分析242
四、思考題247
參考文獻(xiàn)248