本書是介紹基因工程方面的實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理的教材,主要介紹的是基因工程實(shí)驗(yàn)技術(shù)過程中的理論,側(cè)重介紹針對本科生的成熟經(jīng)典的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。主要內(nèi)容包括基因工程實(shí)驗(yàn)室基本要求和常規(guī)儀器設(shè)備、核酸電泳技術(shù)、核酸工具酶、核酸的分離純化、PCR技術(shù)、基因工程常用載體、目的基因的克隆、重組子的構(gòu)建與轉(zhuǎn)化和篩選、大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)、酵母表達(dá)系統(tǒng)等。
《基因工程原理與技術(shù)》為作者長期從事《基因工程原理》課程教學(xué)的經(jīng)驗(yàn)的總結(jié)。通過本書的學(xué)習(xí),學(xué)生能更加深刻地理解基因工程各種理論知識,并能在實(shí)驗(yàn)過程中知道為什么要這樣做,如何去做。
韋宇拓,廣西大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院微生物學(xué)副教授,博士,碩士生導(dǎo)師。主要從事基因工程菌的構(gòu)建、生物產(chǎn)品的開發(fā)研究、蛋白酶分子進(jìn)化、微生物生物技術(shù)等方面的教學(xué)和研究。
目 錄
第一章 基因工程實(shí)驗(yàn)室基本要求和常規(guī)儀器設(shè)備 (1)
第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)室安全和基本環(huán)境要求 (1)
第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器和設(shè)備 (7)
第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)室滅菌、消毒技術(shù) (23)
第二章 核酸電泳技術(shù) (29)
第一節(jié) 核酸電泳的原理 (29)
第二節(jié) 影響核酸電泳的因素 (32)
第三節(jié) 核酸的檢測方法 (37)
第四節(jié) 核酸瓊脂糖凝膠電泳 (41)
第五節(jié) 聚丙烯酰胺凝膠電泳 (51)
第三章 核酸工具酶 (54)
第一節(jié) 限制性核酸內(nèi)切酶 (54)
第二節(jié) 連接酶 (67)
第三節(jié) DNA聚合酶 (73)
第四節(jié) DNA修飾酶 (79)
第五節(jié) 核酸酶 (80)
第四章 核酸的分離純化 (84)
第一節(jié) 核酸分離純化的基本知識 (84)
第二節(jié) 核酸分離純化的基本原則 (91)
第五章 PCR的原理和應(yīng)用 (102)
第一節(jié) PCR技術(shù)的原理 (102)
第二節(jié) PCR反應(yīng)系統(tǒng) (105)
第三節(jié) PCR常規(guī)技術(shù)及其延伸技術(shù) (113)
第四節(jié) 實(shí)時(shí)熒光定量PCR (117)
第六章 基因工程常用載體 (125)
第一節(jié) 基因工程載體的概述 (125)
第二節(jié) 質(zhì)粒載體 (128)
第三節(jié) λ噬菌體載體 (136)
第四節(jié) 噬菌粒載體 (139)
第五節(jié) 柯斯質(zhì)粒載體 (140)
第七章 目的基因的克隆 (142)
第一節(jié) 目的基因的克隆策略 (142)
第二節(jié) 基因組文庫的構(gòu)建 (150)
第三節(jié) cDNA文庫的構(gòu)建 (154)
第四節(jié) 核酸探針的制備 (162)
第八章 重組子的構(gòu)建、轉(zhuǎn)化和篩選 (167)
第一節(jié) 連接方式 (167)
第二節(jié) 重組子的構(gòu)建策略 (171)
第三節(jié) 重組子導(dǎo)入受體細(xì)胞 (178)
第四節(jié) 重組子的篩選方法 (182)
第九章 大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng) (186)
第一節(jié) 基因表達(dá)系統(tǒng)概述 (186)
第二節(jié) 大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)的主要表達(dá)元件 (188)
第三節(jié) 常見的大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng) (191)
第四節(jié) 外源基因在大腸桿菌中表達(dá)的主要影響因素 (194)
第十章 酵母表達(dá)系統(tǒng) (207)
第一節(jié) 酵母表達(dá)系統(tǒng)的發(fā)展 (207)
第二節(jié) 酵母的克隆載體類型 (209)
第三節(jié) 酵母表達(dá)系統(tǒng)主要構(gòu)成要素 (212)
第四節(jié) 常用的酵母表達(dá)系統(tǒng) (216)
第五節(jié) 外源基因在酵母中表達(dá)的基本策略 (221)
主要參考文獻(xiàn) (225)