目錄
1 緒論 1
1.1 水曲柳概述 1
1.1.1 水曲柳生物學(xué)特性和應(yīng)用價值 1
1.1.2 水曲柳繁殖研究現(xiàn)狀 1
1.2 白蠟樹屬植物組織培養(yǎng)的研究進展 2
1.2.1 白蠟樹屬種類及其分布 2
1.2.2 白蠟樹屬組織培養(yǎng)的研究現(xiàn)狀 3
1.3 植物體細胞胚胎發(fā)生的研究進展 5
1.3.1 體細胞胚胎發(fā)生及其特點 5
1.3.2 體細胞胚胎發(fā)生的意義 5
1.3.3 植物體細胞胚胎發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié) 6
1.3.4 植物體細胞胚胎發(fā)生的影響因素 7
1.3.5 植物體細胞胚胎發(fā)生的組織細胞學(xué)研究 9
1.3.6 植物體細胞胚胎發(fā)生中活性氧的研究 13
1.3.7 植物體細胞胚胎發(fā)生中NO的研究 15
1.4 水曲柳體細胞胚胎發(fā)生的研究進展 18
1.4.1 水曲柳體細胞胚胎發(fā)生的研究意義 18
1.4.2 水曲柳體細胞胚胎發(fā)生的研究現(xiàn)狀 18
1.4.3 研究中存在的問題 19
參考文獻 20
2 水曲柳成熟合子胚體細胞胚胎發(fā)生研究 28
2.1 材料與方法 28
2.1.1 試驗材料 28
2.1.2 試驗方法 28
2.1.3 數(shù)據(jù)處理與分析 30
2.2 結(jié)果與分析 30
2.2.1 水曲柳成熟合子胚的體細胞胚誘導(dǎo)研究 30
2.2.2 水曲柳成熟合子胚的體細胞胚成熟 34
2.3 討論 35
2.4 本章結(jié)論 36
參考文獻 37
3 外源H2O2和NO對水曲柳體細胞胚誘導(dǎo)的影響 39
3.1 材料與方法 39
3.1.1 試驗材料 39
3.1.2 試驗方法 39
3.2 結(jié)果與分析 41
3.2.1 H2O2對水曲柳體細胞胚胎發(fā)生的影響 41
3.2.2 CAT對水曲柳體細胞胚胎發(fā)生的影響 42
3.2.3 SNP對水曲柳體細胞胚胎發(fā)生的影響 45
3.2.4 PTIO對水曲柳體細胞胚胎發(fā)生的影響 48
3.3 討論 50
3.3.1 H2O2在水曲柳體細胞胚胎發(fā)生中的作用 50
3.3.2 NO在水曲柳體細胞胚胎發(fā)生中的作用 51
3.4 本章結(jié)論 52
參考文獻 52
4 水曲柳體細胞胚的增殖和植株再生培養(yǎng) 54
4.1 材料與方法 54
4.1.1 試驗材料 54
4.1.2 試驗方法 54
4.1.3 數(shù)據(jù)處理與分析 55
4.2 結(jié)果與分析 56
4.2.1 水曲柳體細胞胚的增殖 56
4.2.2 次生體細胞胚的形態(tài)學(xué)觀察 56
4.2.3 水曲柳次生體細胞胚的萌發(fā) 57
4.2.4 體細胞胚苗的移栽和馴化 59
4.3 討論 59
4.4 本章結(jié)論 59
參考文獻 60
5 水曲柳體細胞胚增殖材料的篩選和繼代次數(shù)分析 61
5.1 材料與方法 61
5.1.1 試驗材料 61
5.1.2 試驗方法 61
5.1.3 數(shù)據(jù)觀察與統(tǒng)計分析 62
5.2 結(jié)果與分析 63
5.2.1 水曲柳體細胞胚增殖培養(yǎng)的材料篩選 63
5.2.2 水曲柳體細胞胚增殖培養(yǎng)的繼代次數(shù)分析 67
5.3 討論 67
5.4 本章結(jié)論 69
參考文獻 70
6 水曲柳體細胞胚萌發(fā)材料的篩選和植株再生能力分析 71
6.1 材料與方法 71
6.1.1 試驗材料 71
6.1.2 試驗方法 71
6.1.3 數(shù)據(jù)觀察與統(tǒng)計分析 73
6.2 結(jié)果與分析 73
6.2.1 水曲柳體細胞胚萌發(fā)培養(yǎng)的材料篩選 73
6.2.2 水曲柳體細胞胚萌發(fā)培養(yǎng)的繼代次數(shù)分析 75
6.2.3 水曲柳體細胞胚生根培養(yǎng)的繼代次數(shù)分析 76
6.2.4 植株的移栽成苗 78
6.3 討論 78
6.4 本章結(jié)論 79
參考文獻 79
7 水曲柳體細胞胚胎發(fā)生中的形態(tài)學(xué)和細胞生物學(xué)觀察 81
7.1 材料與方法 81
7.1.1 試驗材料 81
7.1.2 試驗方法 81
7.2 結(jié)果與分析 83
7.2.1 水曲柳體細胞胚胎發(fā)生的形態(tài)學(xué)觀察和組織學(xué)分析 83
7.2.2 TUNEL細胞凋亡原位檢測結(jié)果 85
7.2.3 DAPI染色結(jié)果分析 86
7.3 討論 87
7.4 本章結(jié) 88
參考文獻 89
8 水曲柳體細胞胚胎發(fā)生中的生物化學(xué)研究 91
8.1 材料與方法 91
8.1.1 試驗材料 91
8.1.2 試驗方法 91
8.1.3 數(shù)據(jù)處理與分析 92
8.2 結(jié)果與分析 92
8.2.1 活性氧代謝研究 92
8.2.2 超氧陰離子含量測定 93
8.2.3 細胞總死亡量測定 95
8.3 討論 96
8.4 本章結(jié)論 97
參考文獻 98
9 外源H2O2和NO對水曲柳體細胞胚胎發(fā)生中PCD的影響 99
9.1 材料與方 99
9.1.1 試驗材料 99
9.1.2 試驗方法 99
9.1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 100
9.2 結(jié)果與分析 100
9.2.1 外源H2O2對水曲柳外植體細胞PCD的影響 100
9.2.2 外源NO對水曲柳外植體細胞PCD的影響 102
9.2.3 DAPI染色觀察細胞核的形態(tài)變化結(jié)果 103
9.3 討論 104
9.3.1 水曲柳體細胞胚胎發(fā)生中的PCD現(xiàn)象 104
9.3.2 外源H2O2對水曲柳外植體細胞PCD的影響 104
9.3.3 外源NO對水曲柳外植體細胞PCD的影響 105
9.4 本章結(jié)論 106
參考文獻 106
10 外源H2O2對外植體細胞死亡和體細胞胚胎發(fā)生的影響 107
10.1 材料與方法 107
10.1.1 試驗材料 107
10.1.2 試驗方法 107
10.1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 108
10.2 結(jié)果與分析 108
10.2.1 細胞總死亡量分析 108
10.2.2 細胞內(nèi)H2O2含量分析 108
10.2.3 細胞內(nèi)NO含量分析 109
10.2.4 相關(guān)性分析 110
10.3 討論 111
10.4 本章結(jié)論 112
參考文獻 113
11 外源H2O2對外植體細胞H2O2代謝和NO合成的影 114
11.1 材料與方法 114
11.1.1 試驗材料 114
11.1.2 試驗方法 114
11.1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 116
11.2 結(jié)果與分析 116
11.2.1 細胞內(nèi)NO和H2O2含量變化 116
11.2.2 ROS相關(guān)酶活性變化 117
11.2.3 NO相關(guān)酶活性變化 119
11.2.4 相關(guān)性分析 120
11.3 討論 121
11.3.1 外源H2O2對內(nèi)源H2O2代謝的影響 121
11.3.2 外源H2O2對內(nèi)源NO合成和代謝的影響 123
11.4 本章結(jié)論 123
參考文獻 123
12 外源NO對外植體細胞死亡和體細胞胚胎發(fā)生的影響 125
12.1 材料與方法 125
12.1.1 試驗材料 125
12.1.2 試驗方法 125
12.1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 125
12.2 結(jié)果與分析 126
12.2.1 細胞總死亡量分析 126
12.2.2 細胞內(nèi)H2O2含量分析 26
12.2.3 細胞內(nèi)NO含量分析 127
12.3 討論 128
12.4 本章結(jié)論 130
參考文獻 130
13 外源NO對外植體細胞H2O2代謝和NO合成的影響 132
13.1 材料與方法 132
13.1.1 試驗材料 132
13.1.2 試驗方法 132
13.1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 132
13.2 結(jié)果與分析 132
13.2.1 細胞內(nèi)NO和H2O2含量變化 132
13.2.2 ROS相關(guān)酶活性變化 134
13.2.3 NO相關(guān)酶活性變化 135
13.2.4 相關(guān)性分析 136
13.3 討論 137
13.3.1 外源NO對內(nèi)源H2O2合成和代謝的影響 137
13.3.2 外源NO對內(nèi)源NO合成和代謝的影響 137
13.4 本章結(jié)論 138
參考文獻 138
14 水曲柳體細胞胚胎發(fā)生中細胞內(nèi)NO合成途徑分析 140
14.1 材料與方法 140
14.1.1 試驗材料 140
14.1.2 試驗方法 140
14.1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 141
14.2 結(jié)果與分析 141
14.2.1 NO抑制劑對體細胞胚胎發(fā)生的影響 141
14.2.2 細胞內(nèi)H2O2含量變化 142
14.2.3 細胞內(nèi)NO含量變化 143
14.2.4 細胞總死亡量分析 144
14.2.5 細胞PCD比例的變化 145
14.3 討論 146
14.4 本章結(jié)論 148
參考文獻 148
15 結(jié)論與研究展望 150
15.1 主要結(jié)論 150
15.2 水曲柳體細胞胚胎發(fā)生的研究展望 153
編后記 155