目錄
前言
第一篇 竹節(jié)參種質(zhì)資源
第一章 竹節(jié)參生物學(xué)特征 3
第一節(jié) 形態(tài)學(xué)特征及其多樣性 3
1.1 形態(tài)學(xué)特征 3
1.2 地上營養(yǎng)器官形態(tài)多樣性 3
1.3 地下根和根狀莖形態(tài)發(fā)育 4
第二節(jié) 竹節(jié)參光合作用及其伴生植物 5
2.1 光合作用 5
2.2 伴生植物 6
第三節(jié) 繁殖生物學(xué)特征 9
3.1 開花特征 9
3.2 雌配子體發(fā)育特征 11
3.3 有性繁殖特征 13
3.4 無性繁殖特征 13
第二章 竹節(jié)參繁殖與栽培管理 14
第一節(jié) 種子繁殖技術(shù) 14
1.1 GA3濃度對(duì)竹節(jié)參種子萌發(fā)的影響 14
1.2 浸種時(shí)間對(duì)竹節(jié)參種子萌發(fā)的影響 15
1.3 浸種溫度對(duì)竹節(jié)參種子萌發(fā)的影響 16
1.4 正交試驗(yàn)優(yōu)化竹節(jié)參種子萌發(fā)條件 16
第二節(jié) 組培繁殖技術(shù) 19
2.1 不同消毒方法對(duì)竹節(jié)參愈傷組織誘導(dǎo)的影響 19
2.2 不同激素水平對(duì)竹節(jié)參愈傷組織誘導(dǎo)的影響 20
2.3 不同激素水平對(duì)竹節(jié)參芽誘導(dǎo)的影響 23
2.4 不同激素水平對(duì)竹節(jié)參根誘導(dǎo)的影響 24
2.5 竹節(jié)參室外移栽 25
第三節(jié) 地下塊莖繁殖技術(shù) 26
3.1 切塊時(shí)間與出苗率的關(guān)系 26
3.2 根狀莖粗細(xì)與苗大小的關(guān)系 26
第四節(jié) 種苗栽培技術(shù) 27
4.1 選地與整地 27
4.2 定植與遮陰 27
4.3 移栽規(guī)格 28
4.4 起苗移栽 28
第五節(jié) 田間管理技術(shù) 28
5.1 除草 28
5.2 松土 29
5.3 追肥 29
5.4 培土 29
5.5 調(diào)節(jié)遮陰度 30
5.6 防旱排澇 30
5.7 疏花疏果 30
5.8 防寒越冬 30
第六節(jié) 病蟲害防治技術(shù) 30
6.1 疫病 31
6.2 紅皮病 31
6.3 蠐螬和地老虎 32
6.4 立枯病 32
6.5 銹腐病、根腐病和菌核病 32
第二篇 竹節(jié)參皂苷檢測及其生物活性
第三章 竹節(jié)參皂苷檢測及含量積累規(guī)律 35
第一節(jié) 竹節(jié)參皂苷提取工藝 36
第二節(jié) 竹節(jié)參總皂苷檢測方法與含量積累規(guī)律 37
2.1 總皂苷檢測方法考察 37
2.2 竹節(jié)參根總皂苷含量動(dòng)態(tài)變化 39
第三節(jié) 竹節(jié)參人參皂苷單體檢測方法與含量積累規(guī)律 40
3.1 人參皂苷單體檢測 40
3.2 人參單體皂苷含量動(dòng)態(tài)變化規(guī)律 43
第四章 竹節(jié)參皂苷生物活性 47
第一節(jié) 抗氧化作用 47
1.1 實(shí)驗(yàn)方法 47
1.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 47
1.3 結(jié)論 47
第二節(jié) 抗疲勞作用 48
2.1 實(shí)驗(yàn)方法 48
2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 48
2.3 結(jié)論 49
第三節(jié) 抗炎作用 49
3.1 實(shí)驗(yàn)方法 49
3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 50
3.3 結(jié)論 50
第四節(jié) 鎮(zhèn)痛作用 50
4.1 實(shí)驗(yàn)方法 50
4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 51
4.3 結(jié)論 51
第五節(jié) 抑制腫瘤作用 51
5.1 實(shí)驗(yàn)方法 51
5.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 52
5.3 結(jié)論 53
第六節(jié) 免疫調(diào)節(jié)作用 53
6.1 實(shí)驗(yàn)方法 53
6.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 54
6.3 結(jié)論 54
第七節(jié) 竹節(jié)參葉的生藥學(xué)鑒定 55
7.1 生藥性狀 55
7.2 藥材性狀 55
7.3 顯微特征 55
7.4 薄層層析鑒別 56
第三篇 竹節(jié)參毛狀根培養(yǎng)的理論及實(shí)踐
第五章 竹節(jié)參毛狀根培養(yǎng)的理論基礎(chǔ) 61
第一節(jié) 發(fā)根農(nóng)桿菌的分類和結(jié)構(gòu)特征 61
1.1 發(fā)根農(nóng)桿菌的分類 61
1.2 發(fā)根農(nóng)桿菌的結(jié)構(gòu)特征及功能 62
第二節(jié) 發(fā)根農(nóng)桿菌Ri 質(zhì)粒介導(dǎo)的植物遺傳轉(zhuǎn)化原理及過程 64
2.1 發(fā)根農(nóng)桿菌Ri質(zhì)粒介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化機(jī)制 65
2.2 發(fā)根農(nóng)桿菌Ri質(zhì)粒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)化策略 67
2.3 發(fā)根農(nóng)桿菌Ri質(zhì)粒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法 70
2.4 發(fā)根農(nóng)桿菌Ri質(zhì)粒介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)化的影響因素 71
第三節(jié) 發(fā)根農(nóng)桿菌Ri質(zhì)粒誘導(dǎo)產(chǎn)生毛狀根的特點(diǎn) 74
第四節(jié) 毛狀根的培養(yǎng)與檢測 75
4.1 毛狀根的培養(yǎng) 75
4.2 培養(yǎng)毛狀根的檢測 76
第五節(jié) 生物反應(yīng)器與毛狀根大規(guī)模培養(yǎng) 77
5.1 毛狀根大規(guī)模培養(yǎng)的新型反應(yīng)器設(shè)計(jì)原則 77
5.2 適用于毛狀根大規(guī)模培養(yǎng)的生物反應(yīng)器 78
5.3 毛狀根大規(guī)模培養(yǎng)的新技術(shù) 81
第六節(jié) 毛狀根培養(yǎng)條件篩選 81
第七節(jié) 影響毛狀根次生代謝產(chǎn)物合成的因素 83
7.1 化學(xué)因素 83
7.2 物理?xiàng)l件 88
7.3 誘導(dǎo)子 90
第六章 竹節(jié)參毛狀根培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)技術(shù) 94
第一節(jié) 受體轉(zhuǎn)化體系的構(gòu)建 94
1.1 利用種子建立受體轉(zhuǎn)化材料 94
1.2 利用外植體建立受體轉(zhuǎn)化材料 96
第二節(jié) 毛狀根的誘導(dǎo)與培養(yǎng) 97
2.1 實(shí)驗(yàn)原理 97
2.2 實(shí)驗(yàn)操作過程 98
2.3 YEB培養(yǎng)基的配制 99
第三節(jié) 毛狀根DNA的提取及PCR檢測 99
3.1 毛狀根的DNA提取 99
3.2 植物轉(zhuǎn)化毛狀根的PCR檢測 102
第四節(jié) 藥用植物毛狀根中次生代謝產(chǎn)物的測定 104
4.1 植物毛狀根中特征成分的總物質(zhì)含量測定 104
4.2 植物毛狀根中單體成分的HPLC測定 106
第五節(jié) 毛狀根離體培養(yǎng)及植株再生 107
5.1 實(shí)驗(yàn)原理與目的 107
5.2 材料與試劑 107
5.3 實(shí)驗(yàn)方法 107
第六節(jié) 毛狀根rol序列基因的克隆 108
6.1 植物毛狀根RNA的提取 108
6.2 植物毛狀根rol序列基因的克隆 110
第七節(jié) 發(fā)根農(nóng)桿菌介導(dǎo)的目的基因轉(zhuǎn)化 117
7.1 實(shí)驗(yàn)原理 117
7.2 材料 117
7.3 操作過程 117
第七章 應(yīng)用毛狀根培養(yǎng)技術(shù)合成竹節(jié)參皂苷 119
第一節(jié) 竹節(jié)參毛狀根培養(yǎng)技術(shù)體系 119
1.1 毛狀根的誘導(dǎo)與培養(yǎng) 119
1.2 共培養(yǎng)時(shí)間對(duì)竹節(jié)參毛狀根誘導(dǎo)的影響 120
1.3 植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對(duì)竹節(jié)參毛狀根生物量積累的影響 121
1.4 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)竹節(jié)參毛狀根生物量積累的影響 122
1.5 毛狀根中rolB 基因的PCR 擴(kuò)增 122
第二節(jié) 竹節(jié)參毛狀根合成皂苷 123
2.1 竹節(jié)參毛狀根中人參皂苷的含量 123
2.2 竹節(jié)參毛狀根中人參皂苷含量動(dòng)態(tài)變化規(guī)律 127
第三節(jié) 竹節(jié)參毛狀根培養(yǎng)合成精油 133
3.1 精油含量及其成分 134
3.2 基本成分和特征成分比較 135
3.3 生物合成與轉(zhuǎn)化 136
第四篇 竹節(jié)參三萜皂苷基因工程與代謝調(diào)控
第八章 竹節(jié)參三萜皂苷代謝基因工程 141
第一節(jié) SS基因的克隆及組織表達(dá)譜 142
1.1 RNA的提取與檢測 142
1.2 SS基因核心片段的擴(kuò)增 142
1.3 SS基因3′和5′-RACE片段的擴(kuò)增 143
1.4 SS基因全長的擴(kuò)增 144
1.5 組織表達(dá)譜 145
第二節(jié) SS基因的生物學(xué)信息 145
2.1 基因全長cDNA序列 145
2.2 氨基酸序列與其他物種多重比對(duì) 145
2.3 氨基酸理化性質(zhì) 148
2.4 氨基酸翻譯后磷酸化修飾 149
2.5 信號(hào)肽 150
2.6 亞細(xì)胞定位 151
2.7 跨膜結(jié)構(gòu)域 151
2.8 Domain功能結(jié)構(gòu)域 152
2.9 Motif結(jié)構(gòu) 152
2.10 蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu) 153
2.11 系統(tǒng)進(jìn)化樹 154
第三節(jié) SS 基因植物高效表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化 155
3.1 SS 基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建 155
3.2 潮霉素致死濃度的篩選 156
3.3 工程菌轉(zhuǎn)化煙草及其生長 157
3.4 分子檢測轉(zhuǎn)基因煙草 158
3.5 轉(zhuǎn)化煙草中人參皂苷Re含量 159
第四節(jié) 竹節(jié)參轉(zhuǎn)錄組通用密碼子偏好性分析 160
4.1 GC含量分析及中性繪圖 160
4.2 竹節(jié)參基因有效密碼子數(shù) 161
4.3 同義密碼子相對(duì)使用度及最優(yōu)密碼子 162
4.4 PR2-plot分析 165
參考文獻(xiàn) 167