定 價：56 元
叢書名：全國高等院校醫(yī)學實驗教學規(guī)劃教材
- 作者：周小鷗，余輝，李曼君主編
- 出版時間：2012/1/1
- ISBN：9787030326683
- 出 版 社：科學出版社
- 中圖法分類：R37-33
- 頁碼：264頁
- 紙張：膠版紙
- 版次：1
- 開本：16K
手能力、綜合分析問題、解決問題的能力及自主創(chuàng)新精神。設計編寫原則主要體現(xiàn)在實用性、綜合性、創(chuàng)新性和先進性。本教程的編寫結合各參編院校實驗教學改革的實際，依據(jù)新的培養(yǎng)目標，將醫(yī)學微生物學實驗、人體寄生蟲學實驗和醫(yī)學免疫學實驗的傳統(tǒng)實驗內容重新進行優(yōu)化整合，并增加了綜合性實驗和創(chuàng)新性實驗內容。在總論部分，將形態(tài)學實驗室常規(guī)儀器設備和實驗動物操作技術做系統(tǒng)全面介紹；在創(chuàng)新性實驗部分，增加了科研的基礎知識，并提供部分科研參考選題；增添了免疫學綜合實驗，微生物學病案分析，寄生蟲病動物模型復制和流行隋況調查等，內容豐富而又實用；對學科間有交叉重復的內容進行了適當?shù)慕M合優(yōu)選，避免教學資源的浪費；全書配有雙色或彩色插圖，便于學生的記憶與操作；且三門學科的實驗獨自成篇，方便教學需要。
本教材適用于醫(yī)藥衛(wèi)生院校本科和專科相關學科的實驗教學，也可供青年教師考研和從事科研工作時參考。
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目錄
第一篇總論
第一章緒論 1
第一節(jié)病原生物學與免疫學實驗的目的和要求 1
第二節(jié)實驗室規(guī)則 1
第三節(jié)實驗室生物安全簡介 2
第二章病原生物學與免疫學常用儀器設備的使用 5
第一節(jié)顯微鏡 5
第二節(jié)離心機 10
第三節(jié)培養(yǎng)箱 11
第四節(jié)電熱恒溫干燥箱 13
第五節(jié)高壓蒸汽滅菌器 14
第六節(jié)菌落計數(shù)器 16
第七節(jié)超凈T作臺 16
第八節(jié)生物安全柜 18
第九節(jié)微量移液器 19
第十節(jié)電泳設備 20
第十一節(jié)分光光度計 22
第十二節(jié)酶標儀 23
第十三節(jié)流式細胞儀 25
第三章實驗動物及操作技術 27
第一節(jié)實驗常用動物 27
第二節(jié)實驗動物的抓取與固定 28
第三節(jié)常用的動物接種方法 30
第四節(jié)實驗動物采血方法 32
第五節(jié)實驗動物的解剖 33
第二篇醫(yī)學免疫學實驗
第四章醫(yī)學免疫學基礎性實驗 37
第一節(jié)凝集反應 37
實驗一直接凝集反應 37
實驗二間接凝集反應 41
實驗三間接凝集抑制試驗 42
第二節(jié)沉淀反廑 44
實驗一單向瓊脂擴散實驗 44
實驗二雙向免疫擴散實驗 45
實驗三對流免疫電泳 47
實驗四免疫電泳 49
實驗五免疫比濁法 50
第三節(jié)免疫標記技術 53
實驗一酶免疫技術 53
實驗二熒光免疫技術 58
實驗三免疫金標記技術 63
第四節(jié)補體參與的免疫反應 66
實驗一補體溶血試驗 66
實驗二血清總補體活性測定 68
實驗三補體依賴的細胞毒試驗 69
第五節(jié)免疫細胞的分離與純化 71
實驗一自然沉降法分離外周血白細胞 71
實驗二密度梯度離心法分離外周血單個核細胞 72
實驗三尼龍棉柱法富集外周血T淋巴細胞 74
實驗四小鼠腹腔巨噬細胞的制備 75
第五章醫(yī)學免疫學綜合性實驗 78
第一節(jié)特異性抗體的制備 78
實驗一抗原與免疫血清的制備 78
實驗二免疫血清的鑒定及純化 80
實驗三單克隆抗體的制備． 83
第二節(jié)免疫印跡 87
實驗免疫印跡技術 87
第三節(jié)免疫細胞的檢測 95
實驗一玫瑰花環(huán)試驗 95
實驗二T淋巴細胞亞群的檢測 96
實驗三淋巴細胞增殖試驗 99
實驗四溶血空斑試驗 104
第四節(jié)非特異性免疫功能的檢洌 107
實驗-NK細胞活性的檢測 107
實驗二巨噬細胞吞噬功能測定 108
實驗三中性粒細胞吞噬功能測定 109
實驗四硝基四氮唑藍還原試驗 110
第五節(jié)細胞因子的檢測 112
實驗一白細胞介素-2的生物活性檢測 112
實驗二腫瘤壞死因子的生物活性檢測 113
第六節(jié)超敏反應的檢測 115
實驗一豚鼠過敏反應試驗 115
實驗二皮膚速發(fā)型超敏反應 116
實驗三血清總IgE測定 117
實驗四循環(huán)免疫復合物的檢測 119
實驗五遲發(fā)型超敏反應試驗（皮膚試驗） 120
第六章醫(yī)學免疫學創(chuàng)新性實驗 122
第一節(jié)創(chuàng)新性實驗的選題、設計與實施 122
第二節(jié)創(chuàng)新性實驗參考選題 127
第三篇醫(yī)學微生物學實驗
第七章醫(yī)學微生物學基礎性實驗 129
第一節(jié)細菌形態(tài)學檢查 129
實驗一不染色標本檢查 129
實驗二革蘭染色和細菌基本形態(tài)觀察 130
實驗三細菌特殊結構的觀察 132
第二節(jié)細菌的分布與消毒滅菌 133
實驗一細菌的分布 133
實驗二物理消毒滅菌法與化學消毒法 133
第三節(jié)細菌分離培養(yǎng)技術 136
實驗細菌接種技術、培養(yǎng)方法和生長現(xiàn)象 136
第四節(jié)細菌鑒定技術 139
實驗一常見生物化學鑒定 139
實驗二細菌血清學鑒定 143
實驗三細菌毒素檢測 145
第五節(jié)細菌的藥物敏感性試驗 146
實驗一液體、固體培養(yǎng)基連續(xù)稀釋法 146
實驗二瓊脂擴散法 147
第八章醫(yī)學微生物學綜合性實驗 150
第一節(jié)醫(yī)院感染的微生物檢測 150
實驗一空氣消毒效果的檢測 150
實驗二血液透析液檢測 151
實驗三壓力蒸汽滅菌器滅菌效果的檢測 151
第二節(jié)人體正常菌群的檢測 152
實驗一腸道正常菌群定性定量檢測 153
實驗二口腔正常菌群檢測 154
第三節(jié)臨床常見病毒的快速檢測 155
實驗一肝炎病毒的檢測 155
實驗二皰疹病毒檢測 156
實驗三人類免疫缺陷病毒( HIV)抗體快速檢測 157
第四節(jié)真菌的檢測 160
實驗一常見淺部真菌檢測（真菌性甲癬標本鏡檢） 160
實驗二常見深部真菌檢測 160
第五節(jié)臨床標本常見細菌的檢查 161
實驗一尿液標本的細菌學檢驗 161
實驗二腸道標本的細菌學檢驗 163
實驗三呼吸道標本的細菌學檢驗 164
實驗四血液及骨髓標本的細菌學檢驗 166
第九章醫(yī)學微生物學創(chuàng)新性實驗 167
第一節(jié)細菌部分 167
第二節(jié)其他微生物部分 168
實驗三孢子蟲、纖毛蟲 178
第二節(jié)醫(yī)學蠕蟲 186
實驗一線蟲 186
實驗二吸蟲 199
實驗三絳蟲 206
第三節(jié)醫(yī)學節(jié)肢動物 214
實驗一昆蟲綱 214
實驗二蛛形綱 221
第十一章醫(yī)學寄生蟲學綜合性實驗 225
第一節(jié)實驗動物感染寄生蟲模型的建立 225
實驗一實驗動物人工感染蛔蟲實驗 225
實驗二實驗動物人工感染血吸蟲實驗 225
第二節(jié)寄生蟲感染的免疫學診斷 227
實驗一環(huán)卵沉淀試驗檢測血吸蟲感染 227
實驗二酶聯(lián)免疫吸附法檢測弓形蟲感染 228
第三節(jié)寄生蟲病案分析 231
第十二章醫(yī)學寄生蟲學創(chuàng)新性實驗 239
第一節(jié)寄生蟲感染調查 239
流行病學調查的基本步驟 239
實驗一市售蔬菜的寄生蟲卵污染狀況調查 239
實驗二幼兒園兒童蠕形住腸線蟲感染狀況調查 240
實驗三大學生蠕型螨感染情況調查 241
實驗田食用豬肉寄生蟲感染的調查 242
實驗五肝吸蟲病流行病學調查 243
第二節(jié)原蟲培養(yǎng) 243
實驗一陰道毛滴蟲的體外培養(yǎng) 243
實驗二陰道毛滴蟲藥物敏感性觀察 244
附錄一免疫學常用試劑的配制 246
附錄二微生物學常用染色液及培養(yǎng)基的配制 257
附錄三寄生蟲標本介紹 260
附錄四人體主要寄生蟲卵圖 263
參考文獻 264
第一篇 總論
第一章 緒論
第一節(jié) 病原生物學與免疫學實驗的目的和要求
一、病原生物學與免疫學實驗的目的
1.通過實驗觀察和技術操作，加強和鞏固對課堂基本理論的理解和運用。
2.學習和掌握病原生物學與免疫學的基本操作技術。
3.培養(yǎng)學生從事科學實驗的能力，即觀察記錄實驗結果、整理分析實驗資料、綜合書寫
實驗報告和論文的能力。
4.培養(yǎng)學生嚴謹求實的科學作風，獨立分析問題和解決問題的能力，互相幫助和團結
協(xié)作的精神。
二、病原生物學與免疫學實驗的要求
1.課前做好充分預習，明確實驗目的、原理、內容、操作步驟及注意事項，盡量避免或減
少錯誤發(fā)生。
2.在實驗過程中，要堅持實驗的嚴肅性、嚴格性及嚴謹性。對操作性實驗應按照實驗
指導所列的步驟依次進行，仔細觀察并認真記錄實驗結果或繪圖；對示教的實驗也要仔細
觀察，并聯(lián)系有關理論進行積極思考；設計性實驗要嚴格按照科研程序完成；實驗中注意科
學合理地分配和運用時間；幾人同做一項實驗時，要注意分工協(xié)作，密切配合。
3.實驗結果必須如實記錄，認真分析得出結論。遇有與理論不符的結果時，應分析探
討其原因，培養(yǎng)科學思維能力。實驗課后，須按時、按要求遞交實驗報告。
4.嚴格遵守實驗室規(guī)則，防止各種事故發(fā)生。
第二節(jié) 實驗室規(guī)則
在病原生物學和免疫學實驗過程中，經(jīng)常要接觸到病原微生物和寄生蟲等具有傳染性
的材料，為保證實驗效果，同時避免病原微生物和寄生蟲的實驗室污染，保證實驗操作者的
安全，必須遵守以下規(guī)則。
1.進入實驗室上課時必須穿好白大衣，必要時戴帽子和口罩，離開實驗室時脫下反折。
白大衣應經(jīng)常清洗消毒，保持潔凈。
2.必要的實驗指導、實驗報告及文具（如鉛筆、彩色鉛筆和小尺）等物品帶入后，應放在
實驗臺下的抽屜里，其他個人物品如書包、衣物等一律不得帶入實驗室。
3.實驗室內嚴禁飲食、吸煙、用嘴濕潤鉛筆或標簽等，不要用手觸摸頭面部及身體暴露
部位，以防感染。
4.實驗室內應保持安靜，不得高聲談笑或隨意走動，以免影響他人。
5.注意安全、保護環(huán)境：
�。�1）每項微生物實驗都要堅持無菌操作，嚴禁隨意丟棄具有感染性的病原體、感染性材
料、培養(yǎng)物、污染物、動物尸體及排泄物，以免污染環(huán)境。
�。�2）使用過的吸管、滴管、試管、玻片等帶菌器材，應放在指定地點或含有消毒液的容器
內，不得放在桌面上，亦不可沖洗于水槽內，以免堵塞排水管。
（3）酒精燈不可互相點燃，以免發(fā)生意外。
（4）未經(jīng)許可，不得將實驗室內任何物品（尤其是菌種等）帶出實驗室。
6.實驗過程中若不慎將傳染性標本污染桌面、手及其他物品時，應立即報告老師緊急
處理，切勿隱瞞或自行處理。常見處理如下：
（1）皮膚傷害：先除去異物，用無菌生理鹽水洗凈后，涂2%紅汞或2%碘酒。
�。�2）燒傷：局部涂凡士林，5%鞣酸溶液或2%苦味酸溶液。
�。�3）化學藥品腐蝕傷：若為強酸，先用大量清水沖洗，再用5%碳酸氫鈉溶液洗滌中和；
若為強堿，先用大量清水沖洗，再用5%醋酸溶液或5%硼酸溶液洗滌中和。若受傷部位是
眼部，經(jīng)過上述步驟處理后，再用橄欖油或液狀石蠟1～2滴滴眼。
�。�4）菌液誤入口中：立即將菌液吐入消毒容器中，并用1∶10000高錳酸鉀溶液或3%
H2O2溶液漱口，并根據(jù)菌種不同，服用抗菌藥物預防感染。
�。�5）細菌污染衣物：立即脫下，放入3%甲酚皂溶液（來蘇水）或3%氯胺溶液內浸泡
30min，或仔細包好經(jīng)高壓蒸汽消毒后清洗。
�。�6）菌液污染桌面：將適量的2%～3%甲酚皂溶液或0.1%醋酸氯己定溶液倒入污染
處，浸泡30min抹去。若手上沾有活菌，亦應浸泡上述消毒液3min后，用肥皂和清水洗凈。
7.看示教時，未經(jīng)許可，不得移動顯微鏡推進尺。
8.愛護實驗器材和設備，節(jié)約實驗材料，如不慎損壞實驗儀器或實驗標本，應及時報告
指導老師，并進行登記，酌情處理。
9.實驗完畢應清理臺面，檢查各種實驗標本和實驗器材，并按原位放好或送還標本室，
需培養(yǎng)的標本按要求放入培養(yǎng)箱。離開實驗室前，應用肥皂洗手，必要時用消毒液泡手再
用清水洗凈。
10.值日生負責清潔整理實驗室（包括桌面、地面、實驗設備等），并關好門、窗、水、電后
方可離開。
第三節(jié) 實驗室生物安全簡介
一、實驗室生物安全的重要性
生物安全（biosafety）的概念有狹義和廣義之分。狹義的生物安全是指現(xiàn)代生物技術的研究、
開發(fā)、應用及轉基因生物可能對生物多樣性、生態(tài)環(huán)境和人類健康產生潛在的危害。廣義的生物
安全是指與生物有關的各種因素對社會、經(jīng)濟、人類健康及生態(tài)環(huán)境所產生的危害或潛在風險。
實驗室生物安全（laboratorybiosafety）是指保證實驗室的生物安全條件和狀態(tài)不低于
容許水平，避免實驗室人員、來訪人員、社區(qū)及環(huán)境受到不可接受的損害，符合相關法規(guī)、標
準等對實驗室保證生物安全責任的要求。
二、病原微生物的分類
《病原微生物實驗室生物安全管理條例》（中華人民共和國國務院令第424號，2004年
11月12日）根據(jù)病原微生物的傳染性、感染后對個體或者群體的危害程度，將病原微生物
分為四類：
第一類病原微生物，能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)
現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。如天花病毒、埃博拉病毒和馬爾堡病毒等。
第二類病原微生物，能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與
人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。如艾滋病毒（Ⅰ型和Ⅱ型）、SARS冠狀病毒、高
致病性禽流感病毒、炭疽芽孢桿菌、結核分枝桿菌、霍亂弧菌、鼠疫耶爾森菌等。
第三類病原微生物，能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不
構成嚴重危害，傳播風險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預防
措施的微生物。如登革病毒、各型肝炎病毒、流行性感冒病毒、破傷風桿菌、腦膜炎奈瑟菌、
傷寒沙門菌、志賀菌屬等。
第四類病原微生物，在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物，如小鼠白血
病病毒等。
其中第一類、第二類病原微生物統(tǒng)稱為高致病性病原微生物。醫(yī)學微生物學教學實驗
中使用的微生物主要為第三類和第四類病原微生物。
三、生物安全實驗室的分級
生物安全實驗室（biosafetylaboratory，BSL），簡稱BSL實驗室，在結構上由兩部分硬
件組成，即一級防護屏障（安全設備）和二級防護屏障（設施）。根據(jù)實驗室對病原微生物的
生物安全防護水平，依照實驗室生物安全國家標準的規(guī)定，將實驗室分為一級、二級、三級、
四級（表1-1）。
BSL-1和BSL-2為基礎實驗室，BSL-3為生物安全防護實驗室，BSL-4為最高生物防護
實驗室。BSL-1和BSL-2實驗室不得從事高致病性病原生物實驗活動，BSL-3和BSL-4實
驗室從事高致病性病原微生物實驗活動。對我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的病原微生
物，任何單位和個人未經(jīng)批準不得從事相關實驗活動。醫(yī)學微生物學教學實驗通常要求在
BSL-1和BSL-2實驗室開展。
四、病原微生物實驗室生物安全
病原微生物實驗室生物安全是避免危險生物因子造成實驗室人員暴露，向實驗室外擴
散并導致危害的綜合措施，以防止實驗人員感染和危險因子外泄而污染環(huán)境。
病原微生物實驗室生物安全的核心是防感染和防擴散。實驗室感染控制工作包括定
期檢查實驗室的生物安全防護、病原微生物菌（毒）種樣本保存與使用、安全操作、實驗室排
放的廢水和廢氣以及其他廢棄物處理等實驗情況。
實驗室發(fā)生高致病性微生物泄露時，實驗室工作人員應當立即采取措施，防止擴散，具
體包括：①封閉被病原微生物污染的實驗室或者可能造成病原微生物擴散的場所；②開展
流行病學調查；③對患者進行隔離治療，對相關人員進行醫(yī)學檢查；④對密切接觸者進行醫(yī)
學觀察；⑤進行現(xiàn)場消毒；⑥對染疫或者疑似染疫的動物采取隔離、捕殺等措施；⑦其他需
要采取的預防、控制措施。
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