目錄
序 i
第二版前言 v
第一版前言 vii
1 概述 1
1.1 流式細胞術(shù)基本概念 2
1.2 分析型流式細胞儀介紹 5
1.3 分選型流式細胞儀介紹 9
參考文獻 13
2 流式細胞儀的原理 14
2.1 液流系統(tǒng) 15
2.2 光路系統(tǒng) 18
2.3 檢測分析系統(tǒng) 28
2.4 分選系統(tǒng) 32
參考文獻 37
3 流式圖 39
3.1 流式通道 40
3.2 流式直方圖 41
3.3 流式散點圖 45
3.4 流式等高線圖 48
參考文獻 50
4 流式細胞術(shù)的基本操作與技巧 51
4.1 樣品制備 52
4.1.1 獨立細胞樣品制備 52
4.1.2 免疫器官樣品制備 54
4.1.3 實體臟器樣品制備 55
4.2 熒光素偶聯(lián)抗體及其標(biāo)記方法 56
4.2.1 熒光素 57
4.2.2 熒光素偶聯(lián)抗體 61
4.2.3 樣品封閉 62
4.2.4 熒光素偶聯(lián)抗體標(biāo)記 64
4.3 光電倍增管電壓設(shè)定 66
4.4 對照的設(shè)置 71
4.4.1 陰性對照的設(shè)置 71
4.4.2 FMO對照 73
4.4.3 陽性對照的設(shè)置 74
4.5 補償調(diào)節(jié) 75
4.5.1 補償調(diào)節(jié)的原理 75
4.5.2 調(diào)節(jié)補償?shù)木唧w方法 76
4.5.3 三色和四色分析補償調(diào)節(jié)方法 79
4.5.4 影響補償大小的因素 82
4.6 閾值設(shè)定 84
4.7 流式分析中的死細胞問題 85
4.7.1 減少樣品中死細胞比例的方法 86
4.7.2 流式分析時區(qū)分死細胞和活細胞的方法 86
4.8 流式分選模式選擇 91
4.8.1 純化模式 92
4.8.2 富集模式 93
4.8.3 單細胞模式 93
4.9 上樣速度控制 94
4.9.1 流式分析速度控制 95
4.9.2 流式分選速度控制 95
4.10 分選設(shè)門基本原則 97
4.11 流式分選基本步驟 99
參考文獻 100
5 流式分析術(shù)的應(yīng)用 102
5.1 細胞群比例測定 103
5.2 表型測定 109
5.3 檢測細胞因子 115
5.3.1 胞內(nèi)染色法檢測細胞因子 116
5.3.2 胞內(nèi)染色法與ELISA法比較 123
5.3.3 CBA法測定細胞因子 125
5.3.4 CBA法與ELISA法比較 127
5.4 檢測細胞增殖 128
5.4.1 相對計數(shù)法 129
5.4.2 示蹤染料標(biāo)記法 133
5.4.3 BrdU和EdU摻入法 138
5.4.4 其他方法 141
5.5 檢測細胞凋亡 142
5.5.1 annexin V/PI雙染色法 142
5.5.2 SYTO/PI雙染色法 145
5.5.3 細胞DNA含量分析法檢測細胞凋亡 146
5.5.4 線粒體損傷檢測法 147
5.5.5 活化的caspase-3檢測法 151
5.5.6 熒光素偶聯(lián)的caspase抑制劑(FLICA)標(biāo)記法 151
5.5.7 甲酰胺誘導(dǎo)ssDNA單抗檢測法 152
5.5.8 TUNEL法 153
5.6 檢測細胞周期 154
5.6.1 非特異性核酸熒光染料標(biāo)記法 154
5.6.2 特異性細胞周期調(diào)節(jié)蛋白檢測法 159
5.7 檢測細胞殺傷能力 160
5.8 檢測細胞吞噬功能 166
5.9 檢測胞內(nèi)活化的激酶 168
5.10 檢測細胞自噬 169
5.11 檢測基因表達 171
5.11.1 GFP報告基因系統(tǒng) 171
5.11.2 lacZ報告基因系統(tǒng) 172
5.11.3 β-內(nèi)酰胺酶報告基因系統(tǒng) 173
5.11.4 新型膜結(jié)合型報告分子系統(tǒng) 174
5.12 檢測細胞內(nèi)兩種蛋白質(zhì)的直接結(jié)合 174
5.12.1 熒光共振能量轉(zhuǎn)移結(jié)合流式細胞術(shù)檢測兩種蛋白質(zhì)的直接結(jié)合 174
5.12.2 雙分子熒光互補結(jié)合流式細胞術(shù)檢測兩種蛋白質(zhì)的直接結(jié)合 176
5.13 微生物學(xué)中的應(yīng)用 177
5.13.1 熒光素偶聯(lián)抗體直接檢測法 178
5.13.2 抗體結(jié)合人工熒光微球直接檢測法 179
5.13.3 微生物活性流式檢測 179
5.13.4 人工微球熒光免疫試驗檢測抗體 180
5.13.5 熒光原位雜交流式檢測法 181
5.13.6 PCR免疫微珠法 182
5.13.7 原位PCR雜交流式檢測法 182
5.14 檢測鈣相關(guān)分子 183
5.14.1 檢測細胞內(nèi)游離的鈣離子水平 183
5.14.2 檢測鈣蛋白酶活性 184
5.14.3 檢測細胞膜鈣泵活性 186
5.15 表觀遺傳學(xué)中的應(yīng)用 188
5.15.1 ChIP-on-beads法 189
5.15.2 檢測細胞水平組蛋白修飾情況 191
5.16 檢測縫隙連接介導(dǎo)的細胞通訊 191
5.17 檢測細胞內(nèi)pH值和鈉氫轉(zhuǎn)運體活性 194
5.17.1 檢測細胞內(nèi)pH值 194
5.15.2 檢測鈉氫轉(zhuǎn)運體活性 196
5.18 其他應(yīng)用 197
5.18.1 檢測活性氧簇 197
5.18.2 檢測細胞內(nèi)游離的鋅離子水平 198
5.18.3 檢測端粒長度 199
5.18.4 檢測脂筏結(jié)合蛋白 201
引文目錄 203
參考文獻 207
6 流式分選術(shù)的應(yīng)用 211
6.1 流式分選與磁性分選 212
6.2 流式分選獨立群體細胞 214
6.3 流式分選非獨立細胞群體 216
6.4 流式分選低比例細胞群體 220
6.4.1 強勢細胞群的輻射影響 220
6.4.2 流式分選結(jié)合磁性分選 221
6.4.3 二次分選法 222
6.5 流式分選干細胞 224
6.5.1 流式分選造血干細胞 224
6.5.2 流式分選側(cè)群干細胞 229
6.5.3 流式分選間充質(zhì)干細胞 231
6.5.4 流式分選腫瘤干細胞 232
參考文獻 235