實驗動物基本操作
實驗動物是生命科學(xué)研究的基礎(chǔ)和條件，而動物實驗是現(xiàn)代生命科學(xué)研究的一個重要手段。免疫學(xué)實驗中，常根據(jù)實驗?zāi)康暮鸵�求的不同選用不同的動物。免疫學(xué)常見的實驗動物有小鼠、大鼠、豚鼠、家兔和綿羊等。本章介紹動物實驗的幾種基本操作，包括實驗動物的抓取、固定、給藥、采血等，這些基本操作是免疫學(xué)實驗中經(jīng)常用到的，掌握的熟練程度將直接影響實驗?zāi)芊耥樌�進行。
實驗一 實驗動物的抓取與固定方法
實驗動物的抓取與固定是動物實驗操作技術(shù)中昀基本又很重要的一項基本技能。在進行實驗時，為了不損傷動物的健康，不影響觀察指標(biāo)，并防止被動物咬傷，抓取動物前，要限制動物的活動，使動物處于安靜狀態(tài)。工作人員必須對各種動物的一般習(xí)性有所了解，掌握合理的抓取和固定方法。具體方法根據(jù)實驗內(nèi)容和動物種類而定。操作時要小心仔細、大膽敏捷、熟練準(zhǔn)確、不能粗暴，不能恐嚇動物，同時要愛惜動物，使動物少受痛苦。
【實驗?zāi)康摹?br />掌握小鼠與大鼠的抓取和固定，熟悉豚鼠的抓取和固定，了解家兔的抓取與固定。
【實驗方法】
1. 小鼠的抓取和固定
（1）從鼠籠盒內(nèi)將小鼠尾部捉住并提起，放在籠蓋（或表面粗糙的物體）上，輕輕向后牽拉鼠尾（圖 1-1A）。

（2）在小鼠向前掙脫時，用左手（熟練者也可用同一只手）拇指和示指抓住兩耳和頸部皮膚（圖 1-1B），環(huán)指、小指和手掌心夾住背部皮膚和尾部，并調(diào)整好動物在手中的姿勢（圖 1-1C）。右手即可進行各種操作，如皮下、肌肉和腹腔注射、灌胃，以及其他實驗操作。



圖 1-1小鼠的抓取
（3）如進行解剖手術(shù)和心臟采血等操作，均可使動物先取背臥式（必要時先進行麻醉），再用大頭針或線繩將鼠前后肢依次固定在木板上。

（4）尾靜脈取血或尾靜脈注射時，可用小鼠尾靜脈注射架固定（圖 1-2）；或倒放入適當(dāng)大小和重量的容器，把小鼠放在里面只露尾巴，這種容器能夠壓住尾部不讓其活動，同時可起到驅(qū)趕血液的作用。



圖 1-2小鼠尾靜脈注射架

2. 大鼠的抓取與固定
大鼠的門齒很長，在抓取方法不當(dāng)而受到驚嚇或激怒時易將操作者手指咬傷，所以不要采取突然襲擊式的抓取方法，實驗者應(yīng)戴上防護手套（有經(jīng)驗者也可不戴），右手輕輕抓住大鼠的尾巴向后拉，但要避免抓其尖端，以防尾巴尖端皮膚脫落。左手抓緊大鼠兩耳和頭頸部的皮膚，并將大鼠固定在左手中，右手則可進行操作（圖 1-3）。根據(jù)實驗需要也可進行板式固定或盒式固定，固定方法同小鼠，但固定器材較小鼠大些。

圖 1-3大鼠的抓取

3. 豚鼠的抓取與固定
豚鼠膽小易驚，抓取時必須穩(wěn)、準(zhǔn)、迅速。先用手掌扣住鼠背，抓住其肩胛上方，將手張開，用手環(huán)握住頸部，另一只手托住其臀部，即可輕輕提起、固定（圖 1-4）。其固定方法基本同大鼠。

圖 1-4豚鼠的抓取

4. 家兔的抓取和固定
從籠中抓取家兔時，先輕輕打開籠門，勿使其受驚，隨之將手伸入籠內(nèi)，從頭前阻攔，兔便匍匐不動。此時用右手把兩耳輕壓于手心內(nèi)，抓住頸部的被毛和皮，即可提起兔，然后用左手托住其臀部（圖 1-5A）或者托住其腹部（圖 1-5B），兔身的重量大部分落入左手上。切忌用手抓家兔的兩耳，實驗工作中家兔耳部常被用來進行采血、靜脈注射等，所以家兔的兩耳應(yīng)盡量保持不受損傷。需要進行手術(shù)時，可將家兔固定在兔實驗臺上，固定四肢，門齒用細繩拴住。另外還有盒式固定法，可進行耳緣靜脈注射或采血等操作。

圖 1-5家兔的抓取
【注意事項】
1. 動物處于驚嚇中勿進行任何操作，可等待片刻，待其安靜。

2. 抓取動物切勿猶豫，應(yīng)該膽大心細，速度要快。


3. 抓取小鼠要注意抓緊其頸部皮膚，使其頭部不能轉(zhuǎn)動，可預(yù)防被其咬傷，但切記不可太久，以免引起窒息死亡。
【思考題】
小鼠抓取過程中如何預(yù)防被其咬傷？


實驗二 實驗動物的給藥方法
在動物實驗中，為了觀察藥物引起的機體功能、代謝及形態(tài)等變化，常需要將藥物注入動物體內(nèi)。給藥的途徑和方法多種多樣，可根據(jù)不同的實驗?zāi)康摹�實驗動物和藥物劑型、劑量等進行確定。
【實驗?zāi)康摹?br />掌握小鼠的腹腔注射、灌胃和尾靜脈注射給藥方法；熟悉小鼠的其他給藥方法；了解家兔的給藥方法。
【實驗方法】
1. 皮下注射給藥
皮下注射給藥是將藥液推入動物皮下結(jié)締組織，經(jīng)毛細血管、淋巴管吸收進入血液循環(huán)的過程。
操作時，常規(guī)消毒注射部位皮膚，然后用左手拇指和示指輕輕提起皮膚，右手持注射器，針頭取一鈍角角度刺入皮下，然后將針頭輕輕向左右擺動，如針頭易擺動則表示已刺入皮下，再輕輕抽吸，如無回血，可緩慢將藥物注入皮下。拔針時，左手拇指、示指捏住進針部位片刻，以防止藥物外漏。小鼠注射部位常選腹部兩側(cè)或背部的皮膚（圖 1-6A），豚鼠取腹部和大腿內(nèi)側(cè)，家兔取背部大腿內(nèi)側(cè)或耳根部。小鼠注射量為 0.2～0.5ml，家兔和豚鼠注射量為 0.5～1.0ml。

2. 皮內(nèi)注射給藥
皮內(nèi)注射給藥是將藥液注入皮膚的表皮和真皮之間，觀察皮膚血管的通透性變化或皮內(nèi)反應(yīng)。接種、過敏實驗等一般做皮內(nèi)注射。
將注射部位的被毛剪掉，局部常規(guī)消毒，左手拇指和示指按住皮膚使之繃緊，在兩指之間，用結(jié)核菌素注射器連接 4.5號針頭穿刺，針頭進入皮膚淺層，再向上挑起并稍刺入，將藥液注入皮內(nèi)。注射后皮膚出現(xiàn)一白色小皮丘，注射后 5s再拔出針頭，否則藥液會從針孔流出。雄性動物皮膚緊密，皮內(nèi)注射時較雌性動物難度大。做皮內(nèi)注射常選項背的皮膚（圖 1-6B），注射量為每次 0.1～0.2ml。

3. 肌內(nèi)注射給藥
肌內(nèi)注射給藥應(yīng)選擇肌肉發(fā)達、無大血管通過的部位。
針頭直接刺入肌肉，回抽針?biāo)ㄈ鐭o回血即可注射。小鼠體積小，肌肉少，很少采用肌內(nèi)注射。當(dāng)給小鼠注射不溶于水而混懸于油或其他溶劑中的藥物時，采用肌內(nèi)注射，注射部位多選大腿部肌肉（圖 1-6C），注射量每腿不超過 0.1ml。家兔、豚鼠多選臀部、大腿內(nèi)側(cè)或外側(cè)，注射量不超過 2.0ml。

圖 1-6小鼠的皮內(nèi)、皮下和肌內(nèi)注射給藥

4. 灌胃給藥
固定動物，使其頭、頸和身體呈一直線。灌胃針頭從嘴角進入，壓住舌頭，抵住上顎，輕輕向內(nèi)推進，進入食管后會有一個落空感，進入后就可以推注藥液了。如遇阻力，應(yīng)退出后重插，不能強力插，以免穿破食管或誤入氣管。每只小鼠的灌胃昀大容積不超過 0.8ml（圖 1-7A）。

5. 腹腔注射給藥
用左手捕捉固定動物，使其腹部向上，鼠頭略低于尾部，右手將注射針頭自下腹部靠近腹白線的稍左側(cè)或右側(cè)刺入皮下，使針頭向前推 0.5～1.0cm，再以 45°角穿過腹肌刺向腹腔，此時有落空感，回抽無腸液、尿液和血液后緩慢注入藥液。注射完藥物后，緩緩拔出針頭，并輕微旋轉(zhuǎn)針頭，防止漏液。小鼠腹腔注射的給藥量為
0.5～1.0ml（圖 1-7B）。家兔等較大動物注射應(yīng)先固定，于腹部中線旁側(cè) 1cm注射，注射量為 5.0ml。

6. 尾靜脈注射給藥
（1）小鼠：固定小鼠后，采用 75%酒精棉球擦拭的方法或者溫水浸泡的方法使小鼠的血管充盈。若小鼠的血管很不清楚，推薦采用溫水浸泡的方法，水溫以不燙手為宜。溫水浸泡 2～3min后，取出小鼠尾巴，用干棉球擦拭，待血管充盈，用酒精棉球擦拭后就可以進針了。若血管還未充盈，可反復(fù)用溫水浸泡。選擇血管，小鼠尾部有 2條動脈和 3條靜脈， 2條動脈分別在尾部的背側(cè)面和腹側(cè)面， 3條靜脈呈“品”字形分布，一般認為左右的 2條靜脈比較容易注射。一般要求進針部位靠近小鼠的尾端，這樣若注射失敗，還可再向上選擇進針點。但是進針部位不能太靠下，因越往下靜脈越細，操作越困難，一般以小鼠尾巴下 1/3的位置為宜。進針時操作者左手示指和拇指固定住小鼠的尾巴，讓小鼠的尾巴在經(jīng)過拇指后向下彎曲，進針點靠近拇指指甲。針頭和血管呈約 30°角，針尖斜面朝上，輕輕挑刺入皮膚后針頭立即和血管平行，可將針頭刺入血管多半（圖 1-7C）。正常情況下，推注的過程應(yīng)無明顯阻力，血管也不鼓起。推注藥液時動作宜輕柔，若發(fā)現(xiàn)血管鼓起，則表明針頭未刺入血管，需立即拔出針頭。拔出針頭后，用拇指按注射部位 1～2min，防止出血。

圖 1-7小鼠的灌胃、腹腔和尾靜脈注射給藥
（2）家兔：將手伸入兔籠內(nèi)，于兔頭前阻攔其跑動，當(dāng)其匍匐不動時，右手抓住頸部皮膚，將兔提起，左手隨之托住其臀部。將家兔按于桌上，一手輕輕按其頸部，一手輕挾耳根，使耳向前。剪去耳緣被毛，用酒精棉球輕輕按摩耳翼，壓迫耳根部靜脈，使耳緣靜脈擴張（圖 1-8A）。用左手拇指與中指、示指抓住耳尖部，右手從耳尖部邊緣平行進針（圖 1-8B），試推少量注射液，如果感覺無阻力，局部也無隆起、血管變色，表示已進入靜脈，可將注射液緩緩注入。若注射有誤，則注射時阻

圖 1-8家兔耳緣靜脈注射給藥