《普通生物化學(xué)教程實驗指導(dǎo)》(以下簡稱《實驗指導(dǎo)》)是與蔣立科、高繼國等人所編《普通生物化學(xué)教程》而配套的實驗指導(dǎo)教材,全書以生物體的初生物質(zhì)和次生物質(zhì)的提取、純化、鑒定為線索,引導(dǎo)讀者認(rèn)識到生物體內(nèi)組成成分不應(yīng)僅局限于糖類、脂類、蛋白質(zhì)和核酸“四大類”物質(zhì),還應(yīng)關(guān)注生物體為適應(yīng)逆境下生存而產(chǎn)生的次生物質(zhì),即凡是由生物體所產(chǎn)生的物質(zhì)均屬于“生物分子”的范疇。本《實驗指導(dǎo)》設(shè)緒論、實驗及附錄三大部分,精選50個實驗,分糖、脂、蛋白質(zhì)、核酸、酶、維生素、生物氧化等幾個方向。
《普通生物化學(xué)教程實驗指導(dǎo)》突出實驗與教材知識的一致性,是為消化和鞏固在課堂中所學(xué)習(xí)知識服務(wù)的,不僅體例、取材新穎,而且選取的實驗經(jīng)過反復(fù)實踐,可操作性好,既可作為各類院校生物等專業(yè)的本科教材,也可作為生物化學(xué)教學(xué)和研究人員的參考書。
本書突出實驗與教材知識的一致性,是為消化和鞏固在課堂中所學(xué)習(xí)知識服務(wù)的,不僅體例、取材新穎,而且選取的實驗經(jīng)過反復(fù)實踐,可操作性好。
緒論
第一節(jié) 做好生化實驗的“字令”
第二節(jié) 學(xué)會當(dāng)好“小先生”
第三節(jié) 實驗室規(guī)則
第四節(jié) 實驗記錄與實驗報告
第一章 糖的化學(xué)
實驗一 還原糖和總糖的測定——3,5-二硝基水楊酸比色法
實驗二 還原糖含量測定——砷鉬酸比色法
實驗三 可溶性總糖測定——蒽酮比色法
實驗四 可溶性糖的分離提取與薄層層析鑒定
實驗五 真菌多糖的提取與鑒定
實驗六 牛眼透明質(zhì)酸的分離及含量測定
第二章 脂類化學(xué)
實驗七 脂肪碘值的測定
實驗八 油脂酸價的測定
實驗九 粗脂肪含量的測定——索氏抽提法
實驗十 豆磷脂的制備與鑒定
第三章 蛋白質(zhì)化學(xué)
實驗十一 氨基酸纖維素薄層層析
實驗十二 胰島素N-末端氨基酸DNS分析法
實驗十三 總氮含量的測定
實驗十四 脯氨酸含量的測定
實驗十五 茚三酮顯色法測定氨基酸含量
實驗十六 賴氨酸含量測定——茚三酮顯色法
實驗十七 考馬斯亮藍(lán)G-250法測定蛋白質(zhì)含量
實驗十八 Folin-酚法測定蛋白質(zhì)含量
實驗十九 紫外吸收法測定蛋白質(zhì)含量
實驗二十 蛋白質(zhì)分子量測定——SDS-PAGE法
實驗二十一 凝膠層析法測定蛋白質(zhì)的分子量
實驗二十二 牛乳中酪蛋白的提取與檢測
第四章 核酸化學(xué)
實驗二十三 酵母RNA的提制——濃鹽法
實驗二十四 酵母RNA與DNA的提取(稀堿法)及顏色反應(yīng)
實驗二十五 地衣酚顯色法測定RNA含量
實驗二十六 三種腺苷酸分離鑒定——醋酸纖維素薄膜電泳法
實驗二十七 紫外吸收法測定核酸的含量
實驗二十八 植物DNA的提取與測定
實驗二十九 總RNA提取與mRNA分離
實驗三十 質(zhì)粒DNA的提取、酶切與鑒定
實驗三十一 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備及轉(zhuǎn)化
實驗三十二 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)
第五章 酶
實驗三十三 淀粉酶活力的測定
實驗三十四 淀粉酶酶學(xué)性質(zhì)研究
實驗三十五 植物組織中蔗糖酶活力的測定
實驗三十六 硝酸還原酶活性的測定
實驗三十七 蛋清溶菌酶的提取及活性測定
實驗三十八 谷氨酸?丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶活性測定
實驗三十九 纖維素酶活力的測定
實驗四十 過氧化物酶活性的測定
實驗四十一 聚丙烯酰胺凝膠電泳分離過氧化物同工酶
實驗四十二 超氧化物歧化酶(SOD)活力測定——鄰苯三酚法
實驗四十三 玉米超氧化物歧化酶(SOD)的分離純化、活力測定及電泳鑒定
第六章 維生素
實驗四十四 維生素A的含量測定
實驗四十五 維生素B1含量測定
實驗四十六 維生素C的含量測定——滴定法
實驗四十七 維生素C的含量測定——比色法
第七章 生物氧化
實驗四十八 細(xì)胞色素體系的作用及其抑制
實驗四十九 琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制實驗
實驗五十過 氧化氫酶的酶活性測定
附錄
附錄一 玻璃儀器的洗滌及各種洗液的配制
附錄二 實驗室常用儀器的使用
附錄三 試劑的配制與保存
附錄四 常見蛋白質(zhì)、核酸等的相關(guān)參數(shù)
附錄五 層析法有關(guān)數(shù)據(jù)表
參考文獻(xiàn)
第一章 糖的化學(xué)
實驗一 還原糖和總糖的測定——3,5-二硝基水楊酸比色法
一、 目的
掌握還原糖和總糖測定的基本原理,進(jìn)一步熟練比色法測定還原糖的操作方法和分光光度計的使用。
二、原理
還原糖的測定是糖定量測定的基本方法。還原糖是指含有自由醛基或酮基的糖類,單糖都是還原糖,雙糖和多糖不一定是還原糖,其中乳糖和麥芽糖是還原糖,蔗糖和淀粉是非還原糖。利用糖的溶解度不同,可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來,對沒有還原性的雙糖和多糖,可用酸水解法使其降解成有還原性的單糖進(jìn)行測定,再分別求出樣品中還原糖和總糖的含量(還原糖以葡萄糖含量計)。
還原糖在堿性條件下加熱被氧化成糖酸及其他產(chǎn)物,3,5-二硝基水楊酸則被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定范圍內(nèi),還原糖的量與棕紅色物質(zhì)顏色的深淺成正比關(guān)系,利用分光光度計,在540hm波長下測定光密度值,查對標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算,便可求出樣品中還原糖和總糖的含量。由于多糖水解為單糖時,每斷裂一個糖苷鍵需加入一分子水,所以在計算多糖含量時應(yīng)乘以0.9。