目錄
前言
第一部分 發(fā)酵工程實驗 1
Ⅰ. 基礎實驗 1
實驗一 產淀粉酶芽孢桿菌的分離 1
實驗二 產蛋白酶菌株的分離 1
實驗三 乳酸菌素產生菌的篩選 4
實驗四 紫外線誘變選育α-淀粉酶高產菌株 11
實驗五 酸性異淀粉酶產生菌的復合誘變育種 11
實驗六 細菌原生質體融合實驗 14
實驗七 微生物菌種的保藏 18
實驗八 微生物培養(yǎng)基的優(yōu)化——單因素實驗 22
實驗九 微生物培養(yǎng)基的優(yōu)化——正交試驗 22
實驗十 霉菌孢子數及發(fā)芽率的測定 26
實驗十一 細菌生長曲線測定 28
實驗十二 細菌淀粉酶酶活曲線的測定 30
實驗十三 機械通風攪拌發(fā)酵罐的結構認識及操作 30
實驗十四 酵母細胞中蔗糖酶粗產物的提取 34
實驗十五 枯草芽孢桿菌發(fā)酵液中α-淀粉酶粗產物的提取 34
實驗十六 厭氧菌的分離及培養(yǎng)技術 34
Ⅱ. 綜合設計實驗 37
實驗十七 生物殺蟲劑蘇云金芽孢桿菌生產實驗 37
實驗十八 檸檬酸發(fā)酵 39
實驗十九 固體發(fā)酵生產纖維素酶 43
實驗二十 酸奶的發(fā)酵 47
第二部分 細胞工程實驗 50
Ⅰ. 基礎實驗 50
實驗一 MS培養(yǎng)基母液和培養(yǎng)基的配制 50
實驗二 植物組織培養(yǎng)技術 53
實驗三 植物細胞的懸浮培養(yǎng)技術 58
實驗四 植物原生質體分離鑒定和培養(yǎng) 58
實驗五 植物細胞融合 62
實驗六 動物細胞融合 62
實驗七 動物細胞微絲束的光學顯微鏡觀察 62
實驗八 線粒體和液泡系的超活染色與觀察 65
實驗九 葉綠體的分離與熒光觀察 67
實驗十 細胞凝集反應 69
實驗十一 細胞膜的滲透性測定 70
實驗十二 細胞活力檢測 72
實驗十三 細胞的凍存與復蘇 72
Ⅱ. 綜合設計實驗 73
實驗十四 細胞周期檢測與同步化 73
實驗十五 細胞凋亡觀察 76
實驗十六 顯微注射技術 76
實驗十七 雜交瘤技術 77
實驗十八 植物細胞的有絲分裂觀察及染色體標本制備 83
實驗十九 掃描電子顯微鏡的原理及操作使用 85
實驗二十 透射電子顯微鏡的原理和操作使用 85
第三部分 酶工程實驗 87
Ⅰ. 基礎實驗 87
實驗一 酵母蔗糖酶的純化 87
實驗二 圓盤電泳法鑒定酵母蔗糖酶的純度 89
實驗三 酵母蔗糖酶的結晶 90
實驗四 酵母蔗糖酶的化學修飾 90
實驗五 SDS-PAGE檢測蔗糖酶分子質量 92
實驗六 酵母蔗糖酶的酶促動力學研究 92
實驗七 固定化酵母細胞及蔗糖酶的檢測 95
實驗八 木瓜蛋白酶消除啤酒中蛋白質渾濁 97
實驗九 尼龍固定化木瓜蛋白酶 98
實驗十 幾丁載體上酶的吸附固定 98
實驗十一 β-半乳糖苷酶菌體細胞的固定化 99
實驗十二 淀粉酶的提取及活力測定 102
實驗十三 大豆肽的制備 102
實驗十四 苯丙氨酸解氨酶的純化及活性測定 103
實驗十五 結晶乳酸脫氫酶(LDH)的制備 103
實驗十六 辣根過氧化物酶的制備及酶比活力的測定 105
實驗十七 凝膠層析柱裝填及柱效測定 106
實驗十八 模擬過氧化物酶的制備、固定化及應用 112
實驗十九 植物組織中蔗糖酶活力的測定 112
實驗二十 正交法測定幾種因素對酶活力的影響 113
Ⅱ. 綜合設計實驗 117
實驗二十一 酸性磷酸酶的分離純化及活性測定 117
實驗二十二 堿性磷酸酶的分離、純化及活性測定 131
實驗二十三 胰蛋白酶的制備、活力測定及動力學研究 131
實驗二十四 重組氯霉素�；�轉移酶蛋白的表達、分離、純化和鑒定 139
第四部分 基因工程實驗 145
Ⅰ. 基礎實驗 145
實驗一 植物基因組DNA的提取 145
實驗二 細菌基因組DNA的制備 145
實驗三 質粒DNA的提取及酶切 145
實驗四 瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA 149
實驗五 從低熔點膠瓊脂糖凝膠中分離回收DNA 片段 150
實驗六 目的基因的PCR 擴增和克隆 153
實驗七 目的基因的酶切和連接 159
實驗八 感受態(tài)細胞的制備及轉化 163
實驗九 轉化子的篩選和鑒定 168
實驗十 目的基因的原核表達 173
實驗十一 植物總RNA的提取 179
實驗十二 RNA質量檢測 179
Ⅱ. 綜合設計實驗 180
實驗十三 目的基因的RT-PCR檢測 180
實驗十四 目的基因表達的實時熒光定量PCR 檢測 187
實驗十五 目的基因的Southern印跡雜交檢測 190
實驗十六 目的基因表達的Northern印跡雜交檢測 195
實驗十七 目的基因表達的Western印跡雜交檢測 197
實驗十八 根癌農桿菌介導的植物基因轉化技術 200
主要參考文獻 203