第一部分 基礎性實驗
實驗1 紙層析法分離氨基酸
【實驗目的】
掌握分配層析的原理；學習氨基酸紙層析法的操作技術(shù)（包括點樣、平衡、展層、顯色、鑒定及定量）；學習未知樣品的氨基酸成分分析的方法（水解、層析及鑒定）。
【實驗原理】
層析法又叫色層分離法、色譜分析法或色譜法。1903年俄國化學家茨維特（M.Tswett）將葉綠素的石油醚溶液通過CaCO3管柱，并繼續(xù)以石油醚淋洗，由于CaCO3對葉綠素中各種色素的吸附能力不同，色素被逐漸分離，在管柱中出現(xiàn)了不同顏色的譜帶或稱色譜（chromatogram），因此稱為色層分離法。1931年有人用氧化鋁柱分離了胡蘿卜素的兩種同分異構(gòu)體，顯示了這一分離技術(shù)的高度分辨力，從此引起了人們的廣泛注意。自1944年應用濾紙作為固定支持物的“紙層析”誕生以來，層析技術(shù)的發(fā)展越來越快，20世紀50年代開始，相繼出現(xiàn)了氣相色譜和高效液相層析，其他如薄層層析、親和層析、凝膠層析等也迅猛發(fā)展。層析分離技術(shù)操作簡便，樣品用量可大可小，既可用于實驗室分離分析，又適用于工業(yè)生產(chǎn)中產(chǎn)品的分析制備。層析法的最大特點是分離效率高，它能分離各種不同性質(zhì)及類似的物質(zhì)，而且既可以用于少量物質(zhì)的分析鑒定，又可用于大量物質(zhì)的分離純化制備�，F(xiàn)已成為生物化學、分子生物學、生物工程等學科廣泛應用而又必不可少的分析工具之一。
根據(jù)固定相基質(zhì)的形式分類，層析可以分為紙層析、薄層層析和柱層析。紙層析是指以濾紙作為基質(zhì)的層析。薄層層析是將基質(zhì)在玻璃、塑料或金屬板等光滑表面輔成一薄層，在薄層上進行層析。柱層析則是指將基質(zhì)填裝在管中形成柱形，在柱中進行層析。
根據(jù)流動相的形式分類，層析可以分為氣相層析和液相層析。氣相層析是指流動相為氣體的層析，而液相層析是指流動相為液體的層析。
根據(jù)分離的原理不同分類，層析主要可以分為吸附層析、分配層析、凝膠過濾層析、離子交換層析、親和層析等。
紙層析所依據(jù)的原理是分配層析，故屬于分配層析的范疇。
（一）分配層析
分配層析法是利用不同的物質(zhì)在兩個相混而互不相溶的溶劑中的分配情況不同而使之得到分離的方法。將分配層析法中的一種溶劑設法固定起來，再用另外一種溶劑來沖洗這個固定溶劑，同樣可達到將不同物質(zhì)分離的目的。把固定起來的溶劑稱為固定相，把用作沖洗的溶劑叫做流動相。為了