《生物化學(xué)實驗(第二版)》在第一版的基礎(chǔ)上,根據(jù)應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)的問題及生物化學(xué)實驗的進展做了修改。全書分為四部分,包括44個實驗。基礎(chǔ)性實驗部分重在基本實驗技能的培訓(xùn);綜合性實驗部分著重實驗原理的應(yīng)用和提高分析能力。這兩部分涵蓋了與生物化學(xué)理論相適應(yīng)的生物化學(xué)實驗內(nèi)容和技術(shù),包括糖、脂、蛋白質(zhì)、核酸、酶、維生素的分離、純化、定性或定量分析,功能和代謝的研究等。設(shè)計性實驗部分在前兩部分的基礎(chǔ)上為學(xué)生提供一個獨立實驗的空間,著重培養(yǎng)學(xué)生的獨立科研能力。附錄介紹了生物化學(xué)實驗室規(guī)則、實驗報告書寫、常用實驗室操作規(guī)范、試劑的配制和一些生物化學(xué)常用數(shù)據(jù)。
《生物化學(xué)實驗(第二版)》可作為普通高等師范院校及非師范院校本、?粕茖W(xué)各專業(yè)及農(nóng)學(xué)、食品各專業(yè)的生物化學(xué)實驗教材,也可作為中學(xué)生物教師的參考用書。
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目錄
第二版前言
第一版前言
第一部分 基礎(chǔ)性實驗
實驗1 紙層析法分離氨基酸 2
實驗2 醋酸纖維素薄膜電泳分離血清蛋白 10
實驗3 考馬斯亮藍染色法測定蛋白質(zhì)含量 14
實驗4 酶的專一性 16
實驗5 酶反應(yīng)動力學(xué)的影響因素 18
實驗6 RNA定量測定 22
實驗7 DNA定量測定(二苯胺法) 24
實驗8 紫外吸收法測定核酸含量 26
實驗9 DNA的瓊脂糖凝膠電泳 28
實驗10 肝糖原的提取和鑒定 32
實驗11 卵磷脂的提取和鑒定 34
實驗12 油脂酸價的測定 36
實驗13 維生素C的定量測定(2,6-二氯酚靛酚滴定法) 38
實驗14 血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力測定 40
第二部分 綜合性實驗
實驗15 SDS-PAGE測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量 44
實驗16 蛋白質(zhì)印跡 50
實驗17 疏水層析分離純化a淀粉酶 53
實驗18 小麥幼苗淀粉酶活性的測定 56
實驗19 正交法測定影響淀粉酶活力的幾種因素 58
實驗20 植物組織中過氧化物酶活力的測定 62
實驗21 乳酸脫氫酶活為測定 64
實驗22 酵母蔗糖酶的粗分離 66
實驗23 離子交換柱層析純化蔗糖酶 69
實驗24 蔗糖酶各級分活性及蛋白質(zhì)含量的測定 72
實驗25 反應(yīng)時間對產(chǎn)物形成的影響 76
實驗26 小麥葉片淀粉酶Vmax和Km測定 78
實驗27 底物濃度對酶促反應(yīng)速度的影響——米氏常數(shù)的測定 80
實驗28 小麥葉片淀粉酶抑制劑動力學(xué)反應(yīng) 82
實驗29 質(zhì)粒DNA的提取、酶切和鑒定 85
實驗30 大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備 92
實驗31 小牛胸腺DNA的制備 94
實驗32 小牛胸腺DNA熔解溫度的測量 97
實驗33 植物基因組提。–TAB法) 100
實驗34 蘿卜過氧化物酶基因rsprxl的擴增 102
實驗35 實時熒光定量PCR 104
實驗36 酵母RNA的提取與組分鑒定 107
實驗37 粗脂肪的定量測定 109
實驗38 丙二醛的測定 112
實驗39 發(fā)酵過程中無機磷的利用和ATP的生成(ATP的生物合成) 115
第三部分 設(shè)計性實驗
實驗40 蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)和等電點測定 118
實驗41 目的基因的擴增與鑒定 121
實驗42 影響肝糖原含量的因素 125
實驗43 酶反應(yīng)最適條件的選擇 127
實驗44 植物過氧化物酶同工酶聚丙烯酰胺凝膠電泳 129
主要參考文獻 132
附錄 133
一、實驗室規(guī)則 133
二、實驗報告書寫 133
三、常用實驗室操作規(guī)范 135
四、試劑的配制 150
第一部分 基礎(chǔ)性實驗
實驗1 紙層析法分離氨基酸
【實驗?zāi)康摹?br>掌握分配層析的原理;學(xué)習(xí)氨基酸紙層析法的操作技術(shù)(包括點樣、平衡、展層、顯色、鑒定及定量);學(xué)習(xí)未知樣品的氨基酸成分分析的方法(水解、層析及鑒定)。
【實驗原理】
層析法又叫色層分離法、色譜分析法或色譜法。1903年俄國化學(xué)家茨維特(M.Tswett)將葉綠素的石油醚溶液通過CaCO3管柱,并繼續(xù)以石油醚淋洗,由于CaCO3對葉綠素中各種色素的吸附能力不同,色素被逐漸分離,在管柱中出現(xiàn)了不同顏色的譜帶或稱色譜(chromatogram),因此稱為色層分離法。1931年有人用氧化鋁柱分離了胡蘿卜素的兩種同分異構(gòu)體,顯示了這一分離技術(shù)的高度分辨力,從此引起了人們的廣泛注意。自1944年應(yīng)用濾紙作為固定支持物的“紙層析”誕生以來,層析技術(shù)的發(fā)展越來越快,20世紀50年代開始,相繼出現(xiàn)了氣相色譜和高效液相層析,其他如薄層層析、親和層析、凝膠層析等也迅猛發(fā)展。層析分離技術(shù)操作簡便,樣品用量可大可小,既可用于實驗室分離分析,又適用于工業(yè)生產(chǎn)中產(chǎn)品的分析制備。層析法的最大特點是分離效率高,它能分離各種不同性質(zhì)及類似的物質(zhì),而且既可以用于少量物質(zhì)的分析鑒定,又可用于大量物質(zhì)的分離純化制備,F(xiàn)已成為生物化學(xué)、分子生物學(xué)、生物工程等學(xué)科廣泛應(yīng)用而又必不可少的分析工具之一。
根據(jù)固定相基質(zhì)的形式分類,層析可以分為紙層析、薄層層析和柱層析。紙層析是指以濾紙作為基質(zhì)的層析。薄層層析是將基質(zhì)在玻璃、塑料或金屬板等光滑表面輔成一薄層,在薄層上進行層析。柱層析則是指將基質(zhì)填裝在管中形成柱形,在柱中進行層析。
根據(jù)流動相的形式分類,層析可以分為氣相層析和液相層析。氣相層析是指流動相為氣體的層析,而液相層析是指流動相為液體的層析。
根據(jù)分離的原理不同分類,層析主要可以分為吸附層析、分配層析、凝膠過濾層析、離子交換層析、親和層析等。
紙層析所依據(jù)的原理是分配層析,故屬于分配層析的范疇。
(一)分配層析
分配層析法是利用不同的物質(zhì)在兩個相混而互不相溶的溶劑中的分配情況不同而使之得到分離的方法。將分配層析法中的一種溶劑設(shè)法固定起來,再用另外一種溶劑來沖洗這個固定溶劑,同樣可達到將不同物質(zhì)分離的目的。把固定起來的溶劑稱為固定相,把用作沖洗的溶劑叫做流動相。為了