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免疫學技術及其應用 
定 價：138 元 叢書名：生命科學實驗指南系列
9 7 2 8 7 7 3 0 4 3 0 0 6 讀者對象:免疫學及相關專業(yè)的本科生，廣大醫(yī)學和生命科學工作者 
本書首先介紹了天然免疫和獲得性免疫中免疫細胞(包括單核巨噬細胞、DC、NK、T細胞、B細胞等)、免疫分子(包括抗體、補體、細胞因子、HLA、TLR等)的理論背景和研究方法。然后介紹廠免疫學相關實驗技術，如免疫標記技術、流式細胞檢測和分選技術、免疫相關分子生物學技術、蛋白質電泳技術、凋亡檢測技術等的原理和應用，并融合了免疫學最新前沿技術，如RNA干擾技術、miRNA技術、蛋白質相互作用、BIAcore技術、激光掃描共聚焦顯微鏡技術、動物疾病模型、轉基因動物等。全書理論性、實用性和前沿性緊密結合，在闡述免疫學基本技術、經(jīng)典實驗的同時，更注重免疫學技術的最新發(fā)展與在實際科研工作中的合理應用。本書貫穿理論聯(lián)系實際的原則，力求原理清晰、簡明規(guī)范、通俗易懂、要點突出、指導性強，強調實驗的影響因素和關鍵的注意事項，以減少讀者在實驗方法選擇上的失誤和操作上的差錯。本書編者大多是有著豐富的免疫學教學經(jīng)驗，且在一線從事免疫學科研工作的中青年教師。
本書適合免疫學及相關專業(yè)的本科生，特別是研究生學習與研究使用，對廣大醫(yī)學和生命科學工作者也有極大的參考價值。
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《 免疫學技術及其應用》首先介紹了天然免疫和獲得性免疫中免疫細胞(包括單核巨噬細胞、DC、NK、T細胞、B細胞等)、免疫分 子(包括抗體、補體、細胞因子、HLA、TLR等)的理論背景和研究方法。然后介紹廠免疫學相關實驗技術，如免疫標記技術、流式細胞檢測和分選技術、免疫相關分子生物學技術、蛋白質電泳技術、凋亡檢測技術等的原理和應用，并融合了免疫學最新前沿技術，如RNA干擾技術、miRNA技術、蛋白質相互作用、BIAcore技術、激光掃描共聚焦顯微鏡技術、動物疾病模型、轉基因動物等。全書理論性、實用性和前沿性緊密結合，在闡述免疫學基本技術、經(jīng)典實驗的同時，更注重免疫學技術的最新發(fā)展與在實際科研工作中的合理應用�！睹庖邔W技術及其應用》貫穿理論聯(lián)系實際的原則，力求原理清晰、簡明規(guī)范、通俗易懂、要點突出、指導性強，強調實驗的影響因素和關鍵的注意事項，以減少讀者在實驗方法選擇上的失誤和操作上的差錯�！睹庖邔W技術及其應用》編者大多是有著豐富的免疫學教學經(jīng)驗，且在一線從事免疫學科研工作的中青年教師。
《免疫學技術及其應用》適合免疫學及相關專業(yè)的本科生，特別是研究生學習與研究使用，對廣大醫(yī)學和生命科學工作者也有極大的參考價值。
目錄
前言 第一章 單核吞噬細胞 1 第一節(jié) 單核吞噬細胞簡介 1 第二節(jié) 單核巨噬細胞的分離 2 一、人外周血單個核細胞的分離 3 二、小鼠腹腔巨噬細胞的分離和純化 4 三、小鼠肺內巨噬細胞的分離 6 四、骨髓巨噬細胞的分離和誘導培養(yǎng) 7 第三節(jié) 單核巨噬細胞表型檢測 8 一、直接法流式檢測巨噬細胞的表型 9 二、間接法流式檢測巨噬細胞的表型 10 第四節(jié) 巨噬細胞的活化及相關檢測 11 一、巨噬細胞的活化 11 二、超氧陰離子的檢測 12 三、一氧化氮的檢測 13 第五節(jié) 巨噬細胞吞噬和殺傷功能的檢測 15 一、巨噬細胞吞噬雞紅細胞 15 二、巨噬細胞吞噬FITC標記的細菌 16 三、巨噬細胞殺傷功能的檢測 17 四、Fc受體介導的吞噬作用 19 五、FcR介導的黏附作用 20 第六節(jié) 巨噬細胞抗腫瘤活性的檢測 21 一、H33342釋放法檢測巨噬細胞對靶細胞的殺傷 22 二、51Cr釋放法檢測巨噬細胞對靶細胞的殺傷 23 第七節(jié) 單核巨噬細胞趨化功能的檢測 24 第八節(jié) 結語 26 參考文獻 28 第二章 樹突狀細胞 29 第一節(jié) 樹突狀細胞的分離 29 一、小鼠脾臟樹突狀細胞的分離 29 二、人外周血樹突狀細胞的分離 31 第二節(jié) 樹突狀細胞的培養(yǎng) 34 一、小鼠骨髓前體細胞培養(yǎng)樹突狀細胞 34 二、人樹突狀細胞的培養(yǎng) 35 第三節(jié) 樹突狀細胞表型和功能檢測 38 一、表型檢測 38 二、吞噬功能檢測 39 三、NO檢測 40 四、細胞因子的檢測 41 五、抗原提呈功能檢測 41 六、混合淋巴細胞反應 42 第四節(jié) 漿細胞樣樹突狀細胞 43 一、漿細胞樣樹突狀細胞的分離 44 二、漿細胞樣樹突狀細胞的培養(yǎng) 45 三、漿細胞樣樹突狀細胞表型及功能檢測 47 第五節(jié) 其他樹突狀細胞亞群 47 參考文獻 49 第三章 NK與NKT細胞 50 第一節(jié) 概述 50 第二節(jié) NK細胞的分離 51 一、各種NK細胞分離方法的比較 51 二、人的NK細胞的分離 52 三、小鼠的NK細胞的分離 56 第三節(jié) NK細胞的功能檢測 60 一、靶細胞的選擇 62 二、形態(tài)學檢測法 62 三、同位素釋放實驗:51Cr釋放檢測法 63 四、LDH釋放檢測法 64 五、AnnexinV/7GAAD標記流式檢測法 66 第四節(jié) 小鼠體內刪除NK細胞 67 第五節(jié) NKT細胞 69 一、人NKT細胞的分離與培養(yǎng) 69 二、小鼠NKT細胞的分離與培養(yǎng) 75 參考文獻 77 第四章 T淋巴細胞 78 第一節(jié) 引言 78 第二節(jié) T細胞分離 79 一、尼龍棉柱分離法 79 二、E花環(huán)分離法 80 三、微量細胞毒法 82 四、磁珠分選法 83 五、流式分選法 84 第三節(jié) T細胞亞群的分離與培養(yǎng) 85 一、CD4＋T細胞及其亞群的分離培養(yǎng) 85 二、CD8＋T細胞分離培養(yǎng)以及CTL的體外誘導 88 第四節(jié) T細胞克隆及T細胞雜交瘤的建立 89 一、人T細胞克隆的建立 89 二、T細胞雜交瘤技術 92 第五節(jié) T細胞增殖實驗 95 一、體外增殖檢測 95 二、體內增殖檢測 99 第六節(jié) 抗原特異性T淋巴細胞反應 102 一、CD4＋T淋巴細胞反應 102 二、CD8＋T淋巴細胞反應 103 第七節(jié) 混合淋巴細胞反應 105 一、單向混合淋巴細胞反應 105 二、雙向混合淋巴細胞反應 106 第八節(jié) CTL殺傷實驗 107 一、51Cr釋放法 107 二、LDH釋放法 109 三、流式細胞標記法 110 四、體內殺傷實驗 111 第九節(jié) 調節(jié)性T細胞的分離、誘導分化與功能檢測 112 一、Treg的分離純化 113 二、Treg的體外誘導分化 114 三、Treg的功能檢測 115 第十節(jié) 記憶性T細胞的研究方法 117 一、流式胞內染色技術 118 二、Tetramer技術的原理與應用 120 三、TCR轉基因小鼠 122 參考文獻 124 第五章 B淋巴細胞 126 第一節(jié) 概述 126 第二節(jié) B淋巴細胞的分離和亞群鑒定 126 一、B淋巴細胞的分離 126 二、各類B細胞亞群的鑒定和分離 131 三、抗原特異性記憶性B細胞的鑒定 133 第三節(jié) B淋巴細胞的分化發(fā)育鑒定 136 一、從造血干細胞到B淋巴細胞的分化鑒定 137 二、B淋巴細胞在骨髓和脾臟中分化發(fā)育的檢測 139 三、B淋巴細胞在外周免疫系統(tǒng)中的成熟過程檢測 144 四、B淋巴細胞的遷移檢測 145 第四節(jié) B細胞的功能分析 146 一、B淋巴細胞的活化方法 146 二、B淋巴細胞的增殖檢測 147 三、免疫球蛋白的類別轉換的誘導和鑒定 150 四、生發(fā)中心反應和漿細胞的檢測 152 五、B淋巴細胞的信號轉導 158 六、從B淋巴細胞中分離脂筏 164 參考文獻 168 第六章 抗原制備的原理及應用 169 第一節(jié) 天然抗原的制備原理及應用 169 一、抗原的粗提 170 二、抗原的分離純化 171 三、抗原的濃縮 180 四、抗原的保存 181 五、抗原的鑒定 182 第二節(jié) 人工抗原的制備原理 182 一、人工結合抗原 182 二、人工合成多肽抗原的制備原理和應用 184 參考文獻 187 第七章 抗體 188 第一節(jié) 概述 188 第二節(jié) 多克隆抗體的制備及鑒定 189 一、抗血清的制備 189 二、抗血清質量的檢測 191 第三節(jié) 單克隆抗體的制備及鑒定 191 第四節(jié) 基因工程抗體的人源化策略和方法 197 一、基因工程抗體的人源化及其高效表達 198 二、小分子抗體 209 第五節(jié) 抗體的純化 211 一、樣品的預處理 211 二、蛋白A或蛋白G交聯(lián)瓊脂糖凝膠親和層析法純化抗體 212 參考文獻 214 第八章 補體 216 第一節(jié) 概述 216 第二節(jié) 補體活性的測定 217 一、血清補體總活性的測定 217 二、補體旁路途徑的總補體活性的測定 220 第三節(jié) 補體介導的細胞毒實驗 221 一、形態(tài)學方法檢測補體介導的細胞毒活性 221 二、其他方法 222 第四節(jié) 補體結合的相關實驗 223 一、補體結合實驗 223 二、免疫黏附血凝實驗 223 第五節(jié) 補體成分的測定 225 一、C4的測定 225 二、B因子的測定 227 三、C3的測定 229 四、C1q的測定 230 五、C1INH的測定 230 第六節(jié) 補體遺傳多態(tài)性的檢測 231 一、C4遺傳多態(tài)性的檢測 231 二、C2遺傳多態(tài)性的檢測 233 三、B因子遺傳多態(tài)性的檢測 234 參考文獻 234 第九章 細胞因子及細胞因子受體 235 第一節(jié) 概述 236 第二節(jié) 白細胞介素 239 一、白細胞介素及其他細胞因子調節(jié)細胞生長的檢測 239 二、一些IL的特殊生物學活性的檢測 248 三、IL蛋白質的檢測 250 四、ILmRNA的檢測 250 第三節(jié) 腫瘤壞死因子 250 一、檢測TNF及細胞因子細胞毒活性的方法 251 二、TNF及其受體家族成員蛋白質的檢測 254 三、TNF及其受體家族成員 mRNA的檢測 255 第四節(jié) 干擾素 255 一、檢測IFN和其他細胞因子抗病毒活性的方法 255 二、檢測IFN生物學活性的其他方法 260 三、IFN蛋白質的檢測 262 四、IFNmRNA的檢測 262 第五節(jié) 趨化因子 263 一、趨化因子趨化活性的檢測 263 二、趨化因子蛋白質的檢測 273 三、趨化因子mRNA的檢測 273 第六節(jié) 集落刺激因子 273 一、SCF誘導MC/9細胞增殖試驗 274 二、集落形成試驗 275 三、CSF蛋白質的檢測 280 四、CSFmRNA的檢測 281 第七節(jié) 細胞表面和細胞內細胞因子檢測技術 281 一、細胞表面細胞因子的分析 282 二、細胞內細胞因子的分析 286 第八節(jié) 細胞因子受體研究技術 290 一、膜型細胞因子受體檢測方法 291 二、可溶性細胞因子受體檢測方法 294 參考文獻 294 第十章 人白細胞抗原分型技術 295 第一節(jié) HLA和HLA分型概述 295 一、HLA概念 295 二、HLA抗原分類 295 三、HLA遺傳特點 296 四、HLA分型及醫(yī)學應用 297 第二節(jié) 血清學分型技術 297 一、HLAGA、HLAGB、HLAGC抗原的血清學分型方法 298 二、HLAGDR、HLAGDQ抗原的血清學分型方法 299 第三節(jié) 細胞學分型技術 300 一、純合子細胞分型法 301 二、預致敏淋巴細胞定型法 301 第四節(jié) DNA分型技術 302 一、限制性片段長度多態(tài)性-聚合酶鏈反應 302 二、序列特異性寡核苷酸-聚合酶鏈反應 302 三、序列特異性引物-聚合酶鏈反應 303 四、單鏈構象多態(tài)性-聚合酶鏈反應 303 五、PCR指紋圖譜 304 六、基因芯片 304 七、展望 305 參考文獻 305 第十一章 模式識別受體 307 第一節(jié) 模式識別受體的種類 307 第二節(jié) Toll樣受體的信號轉導 309 一、Toll樣受體信號轉導的主要途徑及常用研究方法 309 二、Toll樣受體信號分子功能研究的主要方法 311 參考文獻 313 第十二章 免疫熒光技術 314 第一節(jié) 概述 314 第二節(jié) 免疫熒光技術的基本原理 315 一、抗原 抗體反應 315 二、熒光的產生原理 315 三、熒光效率和影響熒光效率的因素 315 第三節(jié) 免疫熒光的基本技術 316 一、抗體的選擇 316 二、熒光素的選擇 316 三、熒光素的種類 316 四、熒光素標記抗體的方法 319 五、熒光抗體的保存 321 六、免疫熒光技術的染色方法 321 第四節(jié) 免疫熒光的分析和檢測技術 323 一、熒光偏振免疫分析 324 二、時間分辨熒光免疫分析 324 參考文獻 327 第十三章 放射免疫技術 328 第一節(jié) 標記抗原的放射免疫技術 328 一、放射免疫技術原理及應用 328 二、實驗方法 332 三、放射免疫分析的應用舉例 337 第二節(jié) 標記抗體的免疫放射技術 338 一、免疫放射技術原理 338 二、免疫放射分析的應用舉例 340 第三節(jié) 放射受體分析技術 341 一、放射受體分析技術原理 341 二、放射受體分析應用舉例 343 第四節(jié) 放射免疫實驗室的放射性防護 344 一、放射性污染的危害 344 二、放射源的管理 344 三、放射免疫分析工作人員的個人防護 345 參考文獻 345 第十四章 免疫酶技術 346 第一節(jié) 概述 346 一、免疫酶技術的原理 346 二、免疫酶技術的分類和命名 346 三、免疫酶技術的特點 347 第二節(jié) 標記酶及其底物 347 一、標記酶及其制備 347 二、抗酶抗體及酶 抗酶復合物的制備 356 第三節(jié) 異相免疫酶標技術 357 一、異相酶免疫測定方法 357 二、酶聯(lián)免疫吸附測定法 357 第四節(jié) 酶聯(lián)免疫斑點檢測法 364 一、單色ELISPOT法檢測分泌細胞因子的細胞 366 二、雙色ELISPOT法 367 第五節(jié) 均相免疫酶標技術 368 一、酶免疫增強測定技術 368 二、克隆酶供體免疫測定 369 參考文獻 369 第十五章 發(fā)光免疫分析技術 371 第一節(jié) 化學發(fā)光和生物發(fā)光 372 一、化學發(fā)光 372 二、生物發(fā)光 374 第二節(jié) 發(fā)光標記物及其標記方法 375 一、發(fā)光標記物的選擇 375 二、發(fā)光標記物常用的標記方法及影響因素 376 第三節(jié) 發(fā)光免疫分析技術分類及發(fā)展前景 378 一、發(fā)光免疫分析技術分類 378 二、目前發(fā)光免疫分析方法的商品化產品常用發(fā)光原理及免疫反應原理 381 第四節(jié) 展望 382 參考文獻 383 第十六章 免疫磁珠技術 384 第一節(jié) 磁性微球 384 一、磁性微球的組成 384 二、磁性微球的分類 385 三、磁性微球的特點 385 四、磁性微球的制備 385 第二節(jié) 免疫磁性微球 386 一、免疫磁性微球簡介 386 二、免疫磁性微球的特點 386 三、免疫磁性微球的制備 387 四、免疫磁性微球的分類 387 第三節(jié) 免疫磁性分離技術 387 一、免疫磁性分離裝置 387 二、免疫磁珠的標記方法 388 三、免疫磁珠分選的方法 389 四、細胞與磁珠的解離 389 第四節(jié) 免疫磁珠分選細胞實例 390 一、直標法陽性分選CD4＋T細胞 390 二、間標法陰性分選CD4＋T細胞 391 第五節(jié) 免疫磁珠分選策略的選擇 392 一、靈活運用陽性分選和陰性分選 393 二、靈活運用直接法和間接法分選 393 三、靈活運用陰性分選后陽性分選 393 四、雙陽性細胞的分離 394 第六節(jié) 免疫磁珠在醫(yī)學上的應用 395 一、細胞分離和純化 395 二、蛋白質或多肽的分離與純化 395 三、核酸的分離和純化 397 四、微生物的檢測 397 五、靶向釋藥系統(tǒng)的載體 398 第七節(jié) 結語 398 參考文獻 398 第十七章 PCR和定量PCR 400 第一節(jié) PCR技術的基本原理和操作 400 一、基本原理 400 二、擴增體系 401 三、反應條件 402 四、PCR技術的基本操作 404 第二節(jié) 定量PCR技術的基本原理 416 一、傳統(tǒng)的終點定量PCR方法 417 二、實時定量PCR方法 418 第三節(jié) 實時熒光定量PCR的實驗操作與優(yōu)化 425 一、基本實驗步驟 425 二、實驗的優(yōu)化 428 第四節(jié) 定量PCR儀及其發(fā)展 429 一、qGPCR儀的分類 429 二、qGPCR儀的性能指標 431 第五節(jié) 實時定量PCR的主要應用 432 一、DNA或RNA的定量檢測分析 433 二、基因表達差異分析 433 三、在醫(yī)學及藥物開發(fā)中的檢測應用 433 四、遺傳學分析中的應用 433 參考文獻 433 第十八章 基因克隆和表達技術 435 第一節(jié) 常用基因克隆和表達載體的分類、特征和用途 436 一、常用克隆載體 437 二、常用表達載體的特征、應用和選擇 438 第二節(jié) 哺乳動物真核表達載體 444 一、哺乳動物質粒表達載體 444 二、哺乳動物病毒表達載體 446 第三節(jié) 基因克隆和表達實施實例 452 一、質粒載體的構建 452 二、質粒載體的原核表達 455 三、質粒載體的真核表達 460 四、病毒載體的表達 464 第四節(jié) 外源基因的導入 473 一、常用基因轉染技術 474 二、基因轉染方法的選擇 477 三、基因轉染實施實例 479 參考文獻 485 第十九章 RNA干擾技術 486 第一節(jié) 概述 486 一、RNA干擾的機制 486 二、RNA干擾的應用 487 第二節(jié) siRNA的設計與篩選原則 488 一、siRNA設計原則 488 二、siRNA干擾效率的檢測與篩選 488 第三節(jié) siRNA的制備 489 一、體外制備siRNA 489 二、體內表達siRNA 489 第四節(jié) 影響RNAi效率的主要因素 490 一、轉染效率 490 二、siRNA的有效性 490 三、靶 mRNA和靶蛋白的穩(wěn)定性 491 四、RNAi操作細節(jié) 491 第五節(jié) RNAi應用實例 491 一、siRNA的設計及合成 491 二、siRNA的轉染 492 三、RNAi干擾效率的檢測 492 參考文獻 494 第二十章 miRNA技術 495 第一節(jié) 概述 495 第二節(jié) miRNA序列數(shù)據(jù)庫 496 第三節(jié) miRNA的提取 497 第四節(jié) miRNA表達譜分析 498 一、miRNA表達譜的高通量分析方法 498 二、qRTGPCR法鑒定單個miRNA的表達差異 499 三、雜交法檢測miRNA的表達 500 第五節(jié) miRNA靶位點預測 500 第六節(jié) miRNA靶基因的實驗驗證 501 第七節(jié) 發(fā)現(xiàn)病毒編碼 miRNA的一般策略 502 參考文獻 503 第二十一章 蛋白質電泳和鑒定技術 504 第一節(jié) 蛋白質電泳技術 504 一、SDSGPAGE 504 二、非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳 507 三、用于小分子肽分析的SDSGPAGE 509 四、蛋白質的雙向電泳 509 第二節(jié) 蛋白質凝膠電泳染色及檢測技術 511 一、考馬斯亮藍染色 511 二、SDSGPAGE銀染方法 512 三、蛋白質凝膠電泳的熒光染色 513 四、聚丙烯酰胺凝膠上磷酸化蛋白質的特異性熒光染色 513 五、糖基化蛋白和非糖基化蛋白的差異性熒光染色 514 參考文獻 515 第二十二章 蛋白質印跡 516 第一節(jié) 概述 516 第二節(jié) Western印跡法 516 一、印跡樣品制備 517 二、SDSGPAGE 518 三、蛋白質轉膜 518 四、蛋白質標記 520 五、蛋白質顯色 521 第三節(jié) 斑點印跡法 522 參考文獻 524 第二十三章 蛋白質相互作用 525 第一節(jié) 酵母雙雜交系統(tǒng)的原理與應用 525 一、酵母雙雜交系統(tǒng)分類 525 二、酵母雙雜交系統(tǒng)的應用 527 第二節(jié) 酵母雙雜交系統(tǒng)應用實例 527 第三節(jié) 免疫共沉淀原理與應用 534 一、免疫共沉淀分類 534 二、免疫共沉淀應用 535 三、免疫共沉淀技術局限性 535 第四節(jié) 免疫共沉淀應用實例 535 第五節(jié) 印跡疊加和FarWestern印跡法原理與應用 540 一、印跡疊加和FarWestern印跡法原理 540 二、印跡疊加和FarWestern應用 541 第六節(jié) FarWestern印跡法應用實例 542 第七節(jié) GSTpullGdown實驗 543 第八節(jié) BIAcore技術 545 一、BIAcore技術原理 545 二、BIAcore芯片分類 545 三、BIAcore技術應用 546 第九節(jié) BIAcore技術應用實例 546 參考文獻 549 第二十四章 免疫學常規(guī)實驗技術 550 第一節(jié) 概述 550 一、基本原理 550 二、抗原抗體反應的特點 551 三、抗原抗體反應的影響因素 553 第二節(jié) 經(jīng)典的抗原抗體反應 554 一、凝集反應 555 二、沉淀反應 558 三、補體參與的試驗 561 四、中和試驗 564 第三節(jié) 免疫電泳技術 564 一、免疫電泳 565 二、對流免疫電泳 566 三、火箭免疫電泳 567 四、交叉電泳 568 五、放射免疫對流電泳 569 第四節(jié) 免疫微粒技術 570 一、膠乳微粒免疫檢測技術 570 二、免疫磁性微粒檢測技術 572 三、脂質體微粒檢測技術 572 參考文獻 575 第二十五章 流式細胞術 576 第一節(jié) 流式分析 576 一、原理 576 二、基本操作 581 三、應用 586 第二節(jié) 流式分選 596 一、原理 596 二、基本操作 598 三、應用 602 參考文獻 605 第二十六章 細胞凋亡和細胞周期的檢測 607 第一節(jié) 細胞凋亡的形態(tài)學檢測 607 一、光鏡 608 二、熒光顯微鏡和共聚焦激光顯微鏡 608 三、電子顯微鏡 610 第二節(jié) 生化和分子生物學檢測 612 一、DNA梯狀圖譜 612 二、原位末端轉移酶標記技術 613 三、酶學檢測 616 第三節(jié) 流式細胞儀檢測 617 一、細胞周期時相分析和亞二倍體 617 二、AnnexinV結合PI或7GAAD染色 618 三、線粒體膜電位的分析 620 第四節(jié) 凋亡相關分子的檢測 621 一、Caspase檢測 621 二、細胞色素c釋放的檢測 623 第五節(jié) 結語 624 參考文獻 625 第二十七章 免疫組織化學技術 626 第一節(jié) 概述 626 一、免疫組織化學概念及基本原理 626 二、免疫組織化學分類 627 三、常用免疫組織化學方法 627 四、免疫組織化學技術的特點 628 第二節(jié) 免疫組織化學的關鍵技術 629 一、細胞和組織取材 629 二、細胞和組織標本的固定 631 三、組織脫水、透明和浸蠟 632 四、組織切片技術 633 五、石蠟切片脫蠟至水 635 六、內源酶及非特異性背景著色的消除 635 七、抗原修復 636 第三節(jié) 酶免疫組織化學染色 639 一、常用染色方法 639 二、染色結果判斷 645 三、免疫組織化學操作要點及技巧 646 第四節(jié) 熒光免疫組織化學技術 647 一、熒光免疫組織化學技術分類 648 二、常用的熒光素 648 三、標本的制備 649 四、熒光抗體染色 650 五、免疫熒光染色影響因素 653 第五節(jié) 免疫金銀法 654 一、免疫金法 654 二、免疫金銀染色 655 三、彩色免疫金銀法 655 參考文獻 657 第二十八章 免疫細胞信號轉導研究技術 658 第一節(jié) 信號轉導的基本理論 658 一、G蛋白及其偶聯(lián)的效應酶 658 二、蛋白激酶C 663 三、鈣信號 665 四、受體酪氨酸激酶及其信號轉導 668 五、非受體酪氨酸激酶及其信號轉導 671 六、脂筏與T細胞信號轉導 675 七、受體絲蘇氨酸蛋白激酶 678 八、磷脂酰肌醇G3G激酶、Akt與信號轉導 681 第二節(jié) 信號轉導與調控研究技術 684 一、抗磷酸化氨基酸的蛋白質印跡檢測 685 二、蛋白激酶和蛋白磷酸酶活性的檢測 686 三、凝膠電泳遷移率變動分析技術 693 四、染色體免疫共沉淀技術 696 五、信號蛋白的泛素化分析技術 698 六、熒光素酶報道基因檢測 702 七、雙分子熒光互補技術研究活細胞中信號蛋白之間的相互作用 704 參考文獻 708 第二十九章 激光掃描共聚焦顯微鏡技術 709 第一節(jié) 激光掃描共聚焦顯微鏡成像原理及結構 709 一、激光掃描共聚焦顯微鏡的成像原理 709 二、激光掃描共聚焦顯微鏡的基本結構 710 第二節(jié) 激光掃描共聚焦顯微鏡成像應用 712 一、熒光探針的選擇及標記方法 712 二、激光掃描共聚焦顯微鏡在免疫學中的應用 713 三、激光掃描共聚焦顯微鏡應用舉例 717 參考文獻 728 第三十章 自身免疫病和炎癥性疾病動物模型 729 第一節(jié) 概述 729 一、實驗動物設計原則 729 二、實驗動物設計注意事項 730 第二節(jié) 自身免疫性腦脊髓炎 730 一、應用PLP和MBP蛋白或多肽誘導主動性EAE 731 二、回輸MBP或PLP特異性淋巴細胞誘導被動性EAE 733 第三節(jié) 自身免疫性甲狀腺炎模型 734 一、免疫法誘導自身免疫性甲狀腺炎 734 二、高碘誘導自身免疫性甲狀腺炎 737 三、自發(fā)性自身免疫性甲狀腺炎 737 第四節(jié) 系統(tǒng)性紅斑狼瘡動物模型 737 第五節(jié) 膠原誘導性關節(jié)炎 738 一、小鼠膠原誘導性關節(jié)炎 738 二、小鼠關節(jié)炎的評定 739 第六節(jié) 炎癥性腸病動物模型 741 一、化學藥物誘導炎癥性腸病模型 742 二、抗原誘導炎癥性腸病模型 746 三、CD4＋CD45RBhiT細胞誘導炎癥性腸病模型 747 四、轉基因和基因敲除炎癥性腸病模型 748 五、自發(fā)性炎癥性腸病模型 750 第七節(jié) 氣道高反應性動物模型 750 一、OVA誘導的呼吸道超敏反應 751 二、使用 WBP檢測呼吸道過敏反應 752 三、OVA致敏氣道誘導氣道超敏反應 754 四、體外檢測氣道對電刺激的反應性 754 第八節(jié) 糖尿病動物模型 755 一、1型糖尿病模型 755 二、2型糖尿病模型 757 第九節(jié) 免疫性血小板減少性紫癜動物模型 761 一、抗血小板血清誘導血小板減少性紫癜模型 761 二、異種血小板誘導血小板減少性紫癜模型 762 第十節(jié) 重癥肌無力模型 762 一、AchR蛋白誘導自身免疫性重癥肌無力模型 762 二、抗 AchR抗體誘導自身免疫性重癥肌無力模型 764 三、AchR多肽片段誘導自身免疫性重癥肌無力模型 765 四、轉基因小鼠自身免疫性重癥肌無力模型 765 參考文獻 766 第三十一章 感染性疾病動物模型 768 第一節(jié) 小鼠利什曼原蟲感染模型 768 一、利什曼原蟲無鞭毛體的復蘇、感染、分離、純化和凍存 769 二、花生凝集素凝集實驗純化利什曼原蟲后發(fā)育期前鞭毛體 770 三、皮膚感染利什曼原蟲的小鼠模型 771 第二節(jié) 小鼠弓形蟲感染模型 772 一、用人類包皮成纖維細胞擴增T．gondii速殖子 773 二、ME49包囊種子庫的維持和保存 773 三、小鼠全身性急性T．gondii感染模型 774 四、小鼠慢性T．gondii腦炎模型 775 五、重癥聯(lián)合免疫缺陷小鼠T．gondii感染模型 775 六、T．gondii感染進展和免疫應答的評估 776 七、RTGPCR檢測T．gondii表面抗原G1 (SAGG1)和SAGG2的 mRNA 777 八、ELISA或RTGPCR法檢測細胞因子來評估T．gondii急性感染或慢性腦炎 777 第三節(jié) 小鼠巨細胞病毒感染模型 777 一、巨細胞病毒感染小鼠模型 778 二、小鼠胚胎原代成纖維細胞的制備 779 三、巨細胞病毒的制備與純化 780 四、唾液腺病毒的制備 781 五、用空斑形成實驗測定巨細胞病毒滴度 782 第四節(jié) 小鼠李斯特菌感染模型 783 一、單核細胞增生性李斯特菌株感染小鼠模型 783 二、小鼠感染李斯特菌后的特異性和非特異性免疫反應評估 784 參考文獻 786 第三十二章 移植排斥實驗研究的小動物模型 787 第一節(jié) 小鼠異位心臟移植模型 787 第二節(jié) 小鼠胰島 (細胞)移植模型 790 第三節(jié) 大鼠原位肝移植模型 792 參考文獻 794 第三十三章 腫瘤動物模型 795 第一節(jié) 自發(fā)性腫瘤動物模型 795 一、小鼠自發(fā)性乳腺癌模型 795 二、小鼠自發(fā)性白血病模型 796 三、其他小鼠自發(fā)性腫瘤模型 796 第二節(jié) 誘發(fā)性腫瘤模型 797 一、化學致癌物的選擇 797 二、化學致癌物的給藥途徑 797 三、常見腫瘤的誘發(fā)模型 798 四、誘發(fā)性腫瘤模型的注意事項 799 第三節(jié) 移植性腫瘤模型 799 一、移植性腫瘤模型的分類 799 二、受者動物的選擇 800 三、腫瘤細胞的選擇 800 四、腫瘤移植部位與途徑的選擇 800 五、移植性腫瘤模型的注意事項 800 第四節(jié) 人體腫瘤移植入缺陷動物 801 第五節(jié) 腫瘤轉移模型 802 一、B16GBL6小鼠黑色素瘤自發(fā)性肺轉移模型 802 二、B16GF10實驗性肺轉移模型 803 三、Lewis肺癌自發(fā)性肺轉移模型 804 四、黑色素瘤脾內移植肝轉移模型 804 五、小鼠 Hep肝癌經(jīng)脾內移植肝轉移模型 805 第六節(jié) 轉基因動物腫瘤模型 806 第七節(jié) 腫瘤模型的評價與免疫細胞研究 806 一、腫瘤的大小和瘤重 806 二、荷瘤動物的存活期 806 三、實體腫瘤組織內單個核細胞的分離 807 參考文獻 808 第三十四章 轉基因動物的建立 809 第一節(jié) 概述 809 一、轉基因動物的概念及發(fā)展史 809 二、轉基因動物技術 809 第二節(jié) 轉基因動物的外源目的基因的設計與構建 810 第三節(jié) 轉基因動物的常用轉基因方法 810 一、顯微注射法 811 二、逆轉錄病毒載體法 811 三、胚胎干細胞介導法 812 四、精子載體法 813 五、其他方法 813 第四節(jié) 轉基因動物的鑒定 814 一、目的基因的整合鑒定 814 二、目的基因轉錄水平的鑒定 815 三、目的基因翻譯水平的鑒定 816 四、目的基因生物學效應及轉基因動物表型的鑒定 816 第五節(jié) 轉基因動物的育種及建系 816 第六節(jié) 轉基因動物的應用 817 一、轉基因動物用于生命科學研究 817 二、轉基因動物用作研究人類疾病的發(fā)病及治療的實驗模型 817 三、轉基因動物作為生物反應器生產藥用蛋白 818 四、轉基因動物在異種器官移植研究中的應用 818 參考文獻 818 第三十五章 基因敲除動物的建立 820 第一節(jié) 概述 820 一、基因敲除動物 820 二、基因敲除技術 820 第二節(jié) 基因敲除動物的建立方法 820 一、利用基因同源重組進行基因敲除 820 二、條件性基因敲除 823 三、誘導性基因敲除 825 四、基因捕獲法 826 五、轉座子系統(tǒng) 827 六、Hit和 Run法 827 七、雙置換法 827 第三節(jié) 結語 828 參考文獻 828 附錄 830 附錄A 常用緩沖液與試劑 830 一、常用酸堿 830 二、常用緩沖液 830 三、ELISA相關試劑 834 四、細胞培養(yǎng)相關試劑 835 五、常用染色試劑 838 六、固定試劑 839 七、蛋白相關試劑與緩沖液 840 八、顯色試劑 841 九、其他 842 附錄B 免疫學常用實驗動物 844 一、常用小鼠品系 844 二、常用大鼠品系 845 三、實驗動物的管理、注射、采血、臟器摘除及解剖 846 四、淋巴細胞分離技術 849 參考文獻 851 附錄C 常用術語 (中英文對照) 852 彩圖
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